血清二氧化碳酶反应终点法测定

血清二氧化碳酶反应终点法测定血清二氧化碳酶反应终点法测定 1.1.实实验验原原理理 Vitros CO 2 试剂是一种干燥，多涂层的，在透明的聚合物支撑基片上涂有分析成份的 化学干片。 将一滴患者样品滴于干片上，分布层会使之均匀地分布。分布层中的高 PH 值能确保 样品中所有的 CO 2 以碳酸氢盐的形式存在。碳酸氢盐分布到凝胶层中，在磷酸烯醇式丙酮 酸羟化酶的作用下被用来羟化磷酸烯醇式丙酮酸，生 成草酰乙酸和无机磷。反应最后是苹 果酸脱氢酶氧化 NADH 及还原草酰乙酸，生成 NAD+ 和苹果酸。本干片要在 37℃下孵育。样 品中的 CO 2 浓度是通过用反射光谱法测定未反应的 NADH 的吸光度来确定的。 测定方式：酶反应终点法 波长：340nm 测试时间和温度：37 ℃约５分钟 反应过程： 磷酸烯醇式丙酮酸羟化酶 碳酸氢根+ 磷酸烯醇式丙酮酸——————————→草酰乙酸+ 磷酸根 苹果酸脱氢酶草酰乙酸+ NADH + H + ————→ 苹果酸+ NAD 2.2.标标本本：：2.1病人准备：无特殊。 2.2样品类型：血清；肝素锂/钠抗凝血浆。 2.3标本采集与处理： 血清和血浆样品：特别要注意的是：不要用枸橼酸盐作抗凝剂。不要从正在静脉注射 的手臂上采血。采血时尽量将真空管装满，否则测试结果最多会偏低 3mmol/L 。样品采集 后 4 小时内要离心标本，吸出血清。处理样品时要将其当成生物污染品。 3.3.标标本本的的存存放放：血清、血浆室温下密封保存最多 24 小时；4～8℃冷藏最多 3 天；-18 ℃ 冷冻保存可长达 1 个月。 4.4.标标本本的的运运输输：样品要放在带盖的容器内以防污染和蒸发，不加盖的样品杯在空气中放 置 1 小时，CO 2 浓度最多要偏低 6mmol/L 。 5.5.标标本本拒拒收收的的标标准准：污染、抗凝剂不符合要求，标本放置时间过长。 6.6.试试验验材材料料：： 6.1测试 CO 2 所需的物品包括：Vitros化学定标物 Kit2 ；Vitros特制质控液；生理盐水 稀释液。 强生厂家提供原装进口，试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。 6.1.1试剂组成：干片成分：反应成份有磷酸烯醇式丙酮酸羟化酶，苹果酸脱氢酶，磷酸 烯醇式丙酮酸和 NADH 。其 它成份有粘合剂，缓 冲剂，抑 制剂，染 色剂，稳 定剂，表 面活性 剂和聚合物交叉连接剂。干片标记：试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码， 有效期限和储藏温度。 6.1.2 试剂准备从冰箱中取出干片盒，在将干片盒打开封装并装入仪器内的干片储藏 器之前必须使其达到室温状态 18～28℃。 因此从冰箱中取出的试剂盒至少要在室温下要放 置 60 分钟，而冷藏的试剂盒至少要在室温下放置 30 分钟。去 除内包装后立即将干片盒放 入仪器的储藏器中。说明：在试剂盒达到室温后的 24 小时之内必须将其装入仪器中。 6.1.3试剂稳定性与贮存 未开封的干片盒：存储在 2～8℃或低于该范围。 在机内干片储藏器中的干片盒：在仪器上放置时间不能超过 4 周，否则要更换新试剂。 当仪器关闭时间不超过 2 个小时时，可 将干片盒留在储藏器中。出 现以下情形要做质控检 测：仪器关闭时间超过 2 小时；再次装载从仪器储藏器中取出的干片盒。 如果储藏正确， Vitros CO 2 干片可保质到包装盒上标明的有效期限。参见 VITROS 250干化学分析仪试剂 稳定性及贮存.SOP 文件。 6.1.4变质指示：超过有效期的试剂干片不能使用。 6.1.5注意事项：为 避免干片盒打开以前其内包装受损，不 能摔打干片盒；不 要让尖利物 刺入内包装。 6.2校准品：用 Vitros化学定标物 Kit2 。血清，尿液和脑脊液都用相同的定标液，不过 各自的 SAVs值不同。有关标准液的配制，使用及保存的配制，保存和稳定的详情，可参 阅 VITROS250干化学分析仪校准品和质控品.SOP 文件。 6.3质控品：使用 Vitros特制的质控物品；若使用其它的一些质控物品，当与别的CO 2 测试方法比 较时就会 出现差异，如 ：用人 血清 /血浆混 合物分离 制成的质控物 品；含 有高 浓度防腐剂，稳定剂和其它化学添加剂的质控物品；乙 烯乙二醇作稳定剂的质控物品不能 使用。 有关质控液的配制，保存和稳定的详情，可参阅 VITROS250干化学分析仪校准品和质 控品.SOP 文件。 7.7.仪仪器器 美国强生厂家 VITROS250全自动干式生化分析仪。具 体测试程序请参阅操作手册的介 绍。 8.8.操操作作步步骤骤：：将试剂复温后直接放入仪器，样品编程，仪器 5 分后自动打印结果。具体 测试程序请参阅 VITROS250操作手册.SOP 。具体定标程序：参阅操作手册的相关章节内容。 何时进行定标：— —在维护和保养时更换了仪器的重要部件。——质控结果持续超出线性 范围内时，详情参阅操作手册。——管理条例上指定的时间，在美国，CLIA 要求至少每 6 个月定标一次。 9.9.检检验验结结果果的的判判断断与与分分析析 10.10.质质量量控控制制：：操作建议：将 质控物质当成生物污染品来处理；将 质控液与患者样品同时 进行测试；每 天至少做一次质控以检测仪器运行状况；选择质控浓度来检查与临床的相关 性；其 它详情参阅操作手册质控章节的有关内容。有 关质控操作的常规性条例可参照国际 质控检测（ IQCT ）的 内容。在 每一批标本中都应把质控血清作为未知标本进行分析，以 2S 为质控警告限，3S 为失控限，绘 制质控图，判 断是否在控。质 控规则参见生化室室内质控 操作规程.SOP 文件。 11.11.计计算算方方法法：：以用 Vitros化学定标物校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直 接报告可靠的检测结果，以 mmol/L报告。 12.12.参参考考值值范范围围国际单位(mmol/L) 血清/血浆22-30mmol/L 此参考范围是测试 60 位健康成人，然后取靶值附近 95% 的结果计算所得。参考值因性 别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己 的参考值。 13.13.临临床床意意义义：：碳酸—碳酸氢盐缓冲系统是人体中维持血液 PH 平衡的重要缓冲系统。进 行总二氧化碳（即碳酸氢盐加上溶解的二氧化碳）测定，再结合临床及实验室的其它测试 值，可用于确定人体酸碱平衡的失调。患呼吸性酸中毒，代谢性碱中毒和碱摄 入过量都会 造成总 CO 2 升高。CO 2 浓度下降见于代偿性呼吸性碱中毒，代 谢性酸中毒和肾功能失调使氢 离子排泄不掉而导致的 CO 2 降低。 14.14.操操作作性性能能 14.1线性范围：血清 5.0-40mmol/L。 14.2精密度：在 Vitros250 生化仪上用质控液来测精密度。结果反映了该方法的精密度。 当仪器维护，周围环境，干片处理和保存，质控液的复溶以及样品处理等方面发生变化都 会影响结果的重复性。 日间精密度 血血清清 样品 1 n=78 样品 2 n=78 x 27 13 sCV (%) 室间精密度 n=20 天 样品 1 样品 2 x