荧光定量PCR仪使用、维护、校准标准操作规程

.实用文档. 文件名称AB7500 荧光定量 PCR 仪使用、维护、校准标准操作规程 复核人： 复核日期： 版本 _____份 修订人 颁发部门制订人： 质保部制订日期： 批准人： 批准日期： 编号SOP04006执行日期 制作份数 修订记录 1.0 修订内容 发送部门 修订原因版本 修订日期 1.1. 目的：目的： 确保荧光定量 PCR 仪能够正确和正常的使用，保证扩增及结果分析的标准化、标准化。 2.2. 范围：范围： 适用于 AB7500 荧光定量 PCR 仪的使用及维护。 3.3. 定义：定义： 无 4.4. 职责：职责： 荧光定量 PCR 仪使用人员负责本规程的实施。 质保部对本规定的有效执行承当监督检查责任。 5.5. 内容：内容： 5.1 室内温度控制在 15～30℃，相对湿度 45～75%。 5.2 仪器操作 5.2.1 依次翻开电脑显示器和电脑主机的电源开关，进入Windows 界面。 5.2.2 接着翻开 AB7500 仪器电源开关，预热 10 分钟。 5.2.3 点击 7500 Software v2.3图标，翻开软件。 5.2.4 按压仪器托盘上的按压位，待托盘弹出后，将所需检测的8 联 PCR 反响管或者 96 孔 PCR 反响 板放入检测孔位，记下放置位置。检测 8 联 PCR 反响管用**反响孔模块，检测 96 孔 PCR 反响 板用**反响孔模块。 〔检测 8 联 PCR 反响管需放入盖紧管盖的空8 联 PCR 反响管配平，检测 96 孔 PCR 反响板无需配平〕 5.2.5 再次按压托盘使其滑入仪器。 5.2.6 新建扩增参数模板：例如新建一个 UG-63-62 的模板，扩增参数是 95° ，10′； 〔95° ，10″；63° ， 45″〕×5 cycles； 〔95° ，10″；62° ，35″〕×40 cycles，在62° 时收集荧光信号〔HEX、FAM信号〕 ， . .实用文档. 20μl 反响体系。 5.2.6.1 在 Setup-Plate Setup-Define Targets and Samples中， 将 Target Name下的 Target1改成 FAM； 点击 Add New Target，将新增的 Target1改成 HEX，点击 Reportee 下拉菜单，选择 VIC。 5.2.6.2 在 Setup-Run -Graphical View 中的 Reaction Volume Per Well 后面输入 20〔20μl 反响 体系〕 。 选中第一个 Holding Stage， 点击 Delete Selected删除； 在 Cycling Stage中的 Number of Cycles 后输入 5，在 Step1中输入时间 10 秒，在 Step2中输入温度 63 度，输入时间 45 秒， 将 63 度下面收集荧光图标点掉； 点击 Add Stage下拉菜单项选择择 Cycling， 在 Cycling Stage 中的 Number of Cycles 后输入 40，在 Step1中输入时间 10 秒，在 Step2中输入温度 62 度， 输入时间 35 秒，在 62 度下面点击图标收集荧光。 5.2.6.3 点击 Save 下拉菜单下的 Save As Tamplate，文件名输入 UG-63-62，保存在默认 ab7500-config-tamplates文件夹内，关闭设置界面。 5.2.7 已有扩增参数模板：在软件 Home 界面中点击 Template，选择需要的模板，点击翻开。例如： UG-63-62，其扩增参数就是95° ，10′； 〔95° ，10″；63° ，45″〕×5 cycles； 〔95° ，10″；62° ，35″〕 ×40 cycles，在 62° 时收集荧光信号〔HEX、FAM信号〕 ，Reaction Volume Per Well:20μl〔20μl 反响体系〕 。 5.2.8 在 Setup-Plate Setup-Assign Targets and Samples中选择 8 联管摆放的位置，全部勾选Sample 1；UGT1A1*6 勾选 HEX，UGT1A1*28 勾选 FAM。 5.2.9 在 Run-Amplification Plot 中点击 START RUN，命名为 20210101-1〔当日日期+当日上机次数， 例:2021 年 1 月 1 日第 1 次上机编号为 20210101-1〕 ，保存在默认文件夹中，开始运行。 5.2.10 结果分析 5.2.10.1 PCR 反响结束后自动保存结果，对扩增曲线进行分析。 5.2.10.2 也可根据分析后图像调节Baseline 的 Start值、 End 值以 〔用户可根据实际情况自行调整， Start 值可以在 3～15、End 值可设在 5～20〕 ，Threshold 值〔Rn〕推荐设定为 5000～15000，点 击 Analyze 进行分析，然后到 Plate 窗口下记录每个反响的Ct 值。 5.2.11实验结束后取出反响管〔切勿翻开管盖〕 ，顺序关闭 AB7500 软件、定量 PCR 仪电源，关闭电脑。 5.3 仪器维护 5.3.1 每周维护 5.3.1.1 检查计算机磁盘空间。如需要，将实验文件归档或备份。 • 至少每周检查一次计算机磁盘空间。 • 如果硬盘的可用空间缺乏其总容量的20%，应将较陈旧的数据传输到备份存储设备上保存。 5.3.1.2 关闭控制 7500 Instrument 的计算机，30 秒后再次开启计算机。 . .实用文档. 5.3.1.3 用无绒布块〔不脱毛〕蘸取75%酒精清洁 7500 Instrument 的外表。 〔注：切勿使用有机溶剂清 洁 7500 Instrument。 〕 5.3.1.4 使用 75%酒精浸泡反响管托架〔晾干后放回仪器内〕 。 5.3.2 每月维护 5.3.2.1 执行背景校准。 〔可执行一次背景校准以检查是否存在污染物〕 5.3.2.2 运行磁盘清理和磁盘碎片整理。 • 至少每月一次。 • 当 Windows®操作系统显示消息提示执行碎片整理时。 • 切勿同时运行磁盘管理实用工具和7500 Real-Time PCR Software。 5.3.3 每半年〔6 个月〕维护 5.3.3.1 检查灯具状态。 ①在 7500 Software中，选择 Instrument→Lamp Status/Replacement以确定卤素灯的状态。 显示 Lamp Status/Replacement对话框： • Condition –表示以下其中一种状况： – Good –灯具工作良好，不需要更换。单击Close。 – Failed –必须更换灯具。单击Close，然后按照 5.3.4.3 步骤更换卤素灯。 – Change Soon –灯具使用超过 2000 小时；生产商建议将其更换。单击Close，然后决 定是否更换灯具。如果断定更换，请按照5.3.4.3 步骤更换卤素灯。 • Usage (Hours) –灯具已照明的总小时数。 • Lamp