试验四酶的特性试验

说明：本实验由四个小实验组成，其中第一个实验（酶的专一性）必说明：本实验由四个小实验组成，其中第一个实验（酶的专一性）必 做，其他三个小实验选做（至少做一个）做，其他三个小实验选做（至少做一个） 写实验报告时，写实验报告时，可以只写需要做的实验内容 可以只写需要做的实验内容 ！！ 实验四实验四 酶的特性实验酶的特性实验 一、实验目的 酶是生物催化剂， 生物体内化学反映大体上都是在酶的催化下进行的。 通过本实验了解 酶催化的特异性、温度对酶活力的影响、PH 对酶活力的影响、激活剂和抑制剂对酶活力的 影响，对于进一步掌握代谢反映及其调控机理具有十分重要的意义。 二、实验内容 本实验由酶的专一性实验、温度对酶活力的影响、PH 对酶活力的影响、激活剂和抑制 剂对酶活力的影响 4 个小实验组成。 （一）酶的专一性 一、实验原理 本实验以唾液淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用为例， 来讲明酶的专一性。 淀粉和蔗糖无还原 性，唾液淀粉酶水解淀粉生成有还原性二糖的麦芽糖，唾液淀粉酶水解淀粉生成有还原性二糖的麦芽糖， 但不能催化蔗糖的水解。 用班氏试剂 检查糖的还原性。 班氏试剂为碱性硫酸铜， 能氧化具还原性的糖， 生成砖红色沉淀氧化亚铜。 二、材料、仪器与试剂 (1)材料：新鲜配制的唾液及其稀释液 (2)仪器：恒温水浴；滚水浴；试管及试管架； (3)试剂：2%蔗糖溶液；溶于溶于 0.3% NaCl0.3% NaCl 的的 0.5%0.5%淀粉溶液；淀粉溶液；班氏试剂。 3、实验操作 （1）稀释唾液的制备 ①唾液的获取 用一次性杯取必然量的饮用水，漱口以清洁口腔，然后在嘴中含10-20ml 饮用水，轻 漱 2min 左右时间，即可取得唾液的原液，内含唾液淀粉酶。 ②不同稀释度唾液的制备（用大试管）（用大试管） 本实验需制备 1：一、1：五、1：20、1：50、1：200 等五个不同浓度的稀释唾液。 举例说明：1:5 指的是稀释了 5 倍的唾液，制备方式为1 份原液+4 份蒸馏水。 1： 20 指的是稀释了 20 倍的唾液， 制备方式为 1 份 1： 5 的稀释液+3 分蒸馏水。 （2）唾液淀粉酶最佳稀释度的肯定（严格按表（严格按表 1 1 添加顺序做实验，用小试管做实验）添加顺序做实验，用小试管做实验） 表 1 唾液淀粉酶稀释度的肯定 3（1： 管号1 （1： 1）2 （1： 5） 20） 0.5%淀粉溶 4 液（滴）（滴） 稀释唾液 （ml）11111 4444 50）200） 4（1：5（1： 37℃恒温水浴中保温 5 分钟 班氏试剂 （ml）11111 沸水浴 2～3 分钟 实验结果 （2）淀粉酶的专一性 表 2 淀粉酶专一性实验 管号123456 0.5%淀粉溶液（滴）（滴） 2%蔗糖溶液（滴） 最佳稀释度唾液（ml） 煮沸过的最佳稀释度唾液 4 － － － 4 － 4 － 1 － 4 1 4 － ―― － 4 － （ml） 蒸馏水（ml）1 －－－11 1－－－－ 37℃恒温水浴中保温 5 分钟 班氏试剂（ml）11 沸水浴 2～3 分钟 实验结果 （二）温度对酶活力的影响 一、实验原理 酶的催化作用受温度的影响。在最适温度下，酶的反映速度最高。淀粉和可溶性淀粉遇 碘呈蓝色，糊精按其分子的大小，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色。最简单的糊精遇碘 不呈颜色，麦芽糖遇碘也不呈色， 在不同温度下，淀粉被唾液淀粉酶水的程度可由水解混合 物遇碘呈现的颜色来判断。 二、材料、仪器与试剂 （1）材料：新鲜配制的唾液及其稀释液 （2）仪器：试管及试管架；恒温水浴；冰浴；滚水浴； （3）试剂：溶于溶于 0.3% NaCl0.3% NaCl 的的 0.5%0.5%淀粉溶液；淀粉溶液；KI－I2 碘溶液； 3、实验操作 取取 4 4 支支干燥的试管，编号后按下表加入试剂： 1111 表 3 温度对酶活力影响实验加样顺序 管号 0.5%淀粉溶液（ml） 最 佳 稀 释 度 唾 液 （ml） 煮沸过的稀释唾液 （ml） 实验结果 摇匀后，将 1、3 号试管放入 37℃恒温水浴中，2 号试管放入冰水中。10 分钟后 1、2、 3 管均掏出（将2 号内液体分两半） ，用KI－I2溶液来查验 1、2、3 号管内淀粉被唾液淀粉 酶水解的程度。记录并解释结果。将 2 号管剩下的一半溶液放入 37℃水浴中继续保温 10 分钟后，再用 KI－I2液实验，记录实验结果。 （三）PH 对酶活力的影响 一、实验原理 酶的活力受环境酶的活力受环境 PHPH 值的影响极为显著。值的影响极为显著。不同酶的最适 PH 不同。本实验观察PH 对唾 液淀粉酶活性的影响。唾液淀粉酶的最适PH 约为 6.8。 二、材料、仪器与试剂 （1）材料：新配制的溶于溶于 0.3%NaCl0.3%NaCl 的的 0.5%0.5%淀粉溶液淀粉溶液 （2）仪器：试管及试管架；吸管；滴管；恒温水浴 （3）试剂：PH 为 5.0、5.8、6.8、8.0 的缓冲溶液；KI－I2碘溶液；PH 试纸 3、实验操作 1 1 1.5 1 2 1.5 1 3 1.5 表 4PH 对酶活性的影响实验 PH 缓冲液（ml） 0.5%淀粉溶液（ml） 5 3 1 5．8 3 1 6．8 3 1 8.0 3 1 向第一个试管加入稀释唾液后，置于37℃的恒温水浴；等待 1min 后 向第二个试管加入稀释唾液，置于37℃的恒温水浴；依次类推！ 最佳稀释度的唾液 1 （ml） 待向第四只试管加入唾液2min 后， 每隔 1 分钟从第 3 管中取出 1 滴反应液于白瓷板上，加碘液检查反应进行情况，直至反应液变为 检查淀粉水解程度 淡棕黄色（颜色有点淡即可）（颜色有点淡即可） 。即可从第一只试管依次添加碘液，时 间间隔也为 1min。 碘液(滴) 现象 1～２1～２1～２1～2 111 为了更好的理解表格内容，下面对实验进程进行说明：为了更好的理解表格内容，下面对实验进程进行说明： 各取缓冲液 3ml，别离注入 4 支带有号码的试管，随后于各个试管中添加0.5%淀粉溶 液 1ml 和最佳稀释度的唾液 1ml。向各试管中加入稀释唾液的时间距离为1 分钟。将各试 管中物质混匀， ，并依次置于 37℃恒温水浴中保温。 待向第 4 管加入唾液 2ml 后，每隔 1 分钟由第 3 管掏出一滴混合液，置于白瓷板上， 加 1 小滴 KI－I2溶液。添加 KI－I2溶液，查验淀粉的水解程度。待混合变成淡棕黄色（颜（颜 色有点淡即可）色有点淡即可）后，向所有试管依次添加 1-2 滴 KI－I2溶液。添加滴 KI－I2溶液的时间距 离，从第 1 管起，亦均为 1 分钟。观察各试管中物质呈现的颜色，分析 pH 对唾液淀粉酶 活性的影响。 （四）唾液淀粉酶的活化及抑制 一、实验原理 酶的活性受活化剂或抑制剂的影响， 氯离子为唾液淀粉酶的活化剂， 铜离子为其抑制剂。 二、材料、仪器与试剂 （1）材料：0.5%淀粉溶液；最佳稀释度的唾液 （2）仪器：试管及试管架；恒温水浴 （3）试剂：1% NaCl 溶液；1% CuSO4溶液；KI－I2碘溶液；1%Na2SO4溶液 3、实验操作（注意本实验的淀粉溶液为无（注意本实验的淀粉溶液为无NaClNa