沉降菌测试标准操作规程

题目：沉降菌测试标准操作规程沉降菌测试标准操作规程制定人：年月日编码： SOP-ZL-HJ-006-01 审核人：年月日颁发部门：质量管理部批准人：年月日执行时间：年月日分发部门：质量管理部、档案室目的：目的：建立洁净室（区）中沉降菌的测试标准操作规程，保证药品在规定洁净级别的区域内进行生产。范围：范围：适用于洁净室（区）的沉降菌的测试。职责：职责：质量管理部、QA 检测员内容：内容： 1、测试方法本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室(区)的洁净度。 2、仪器、设备、培养基 2.1 培养皿：Φ90mm×15mm 培养皿 2.2 培养基：营养琼脂培养基 2.3 生化培养箱：必须定期对生化培养箱进行校验。 2.4 自动台式灭菌器：使用时应严格按照仪器说明书操作。 3、测试条件 3.1 温度和相对湿度：洁净室（区）的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适应，温度控制在 18℃～26℃，相对湿度控制在 45%～65%为宜。 3.2 压差：空气洁净度不同的洁净室（区）之间压差应≥10Pa。 4、测试状态：动态测试和静态测试。静态测试时，室内测试人员不得多于2 人；动态测试时，现场人员数按《洁净区人员控制管理制度》中规定执行，记录中注明现场人员数量及测试点位置。 5、测试时间：对单向流，测试应在净化空气调节系统运行不少于 10 分钟后开始；对非单向流，测试应在净化空气调节系统运行不少于 30 分钟后开始。第 1 页共 9 页 6、采样点数量及布置 6.1 最少采样点数目房间面积（m2）＜10 ≥10—＜20 ≥20—＜40 ≥40—＜100 ≥100—＜200 ≥200—＜400 ≥400—＜1000 ≥1000—＜2000 ≥2000 洁净度级别 100 2—3 4 8 16 40 80 160 400 800 10000 2 2 2 4 10 20 40 100 200 100000 2 2 2 2 3 6 13 32 63 6.2 最少培养皿数在满足最少测点数的同时，还宜满足最少培养皿数，见下表洁净度级别 100 10000 100000 6.3 采样点布置类型所需Φ90mm 培养皿数(以沉降 0.5 h /静态或 4h /动态计) 14 2 2 bca d ef 第 2 页共 9 页 g hi 6.4 采样点的位置 6.4.1 一般布置在离地面 0.8-1.5m 之间或操作平台的高度，除受洁净室（区）的设备限制外，应在整个洁净室（区）均匀布置。 6.4.2 每个采样点一般采样一次，也可以多于 1 次。 6.4.3 布置采样点时，应避开回风口，测试人员应在采样口的下风侧。 7、培养基制备 7.1 依据检测区域的取样点数，按照《培养基配制标准操作规程》制备适量的营养琼脂培养基。 7.2 在超净工作台内，以无菌操作法将配制好的营养琼脂培养基以每皿约 15ml 的装量分装，待培养基凝固后移出洁净区。 7.3将制备的营养琼脂平皿倒置于生化培养箱内35℃培养48小时，确认无菌落数后使用。 7.4 培养皿传进洁净室（区）测试前要进行表面消毒。 8、测试 8.1 将已制备好的培养皿按采样点布置图逐个放置，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养基表面暴露在空气中。 8.2 静态测试时，培养皿暴露时间为30min，动态测试时，培养皿暴露时间为不大于4h。 9、培养：取样结束后将平皿倒置于生化培养箱内35℃培养 72 小时，并以未采样的营养琼脂平皿作对照皿。 10、结果计算 10.1 用计数方法得出各个培养皿的菌落数。 10.1.1 用肉眼对培养皿上所有的菌落直接计数、标记或在菌落计数器上点计，然后用 5～ 10 倍放大镜检查，有否遗漏。 10.1.2 培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。 10.2 每个测点的沉降菌平均菌落数的计算: M1M2Mn n 式中： M---平均菌落数 M= 第 3 页共 9 页 M1---1 号培养皿的菌落数 M2---2 号培养皿的菌落数 Mn---n 号培养皿的菌落数 n---培养皿的总数 11、结果评定 11.1 每个测点的沉降菌的平均菌落数必须低于所规定评定标准的界限。 11.2 在静态测试时，若某测点的沉降菌平均菌落数超过评定标准，则应重新采样两次，两次测试结果均合格才能判为符合。 11.3 若测试结果超标时应及时与生产部门联系，对该区域进行消毒或其它处理，然后重新测试至合格。 11.4 洁净区沉降菌控制标准洁净度级别沉降菌 cfu/4 小时标准警戒限纠偏限 A ＜1 -- -- B 5 3 4 C 50 40 45 D 100 80 90 1、表中数值均为平均值。 2、单个沉降碟的暴露时间可以少于 4 小时，同一位置可使用多个沉降碟连续进行检测并积累计数。 12、注意事项 12.1 采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。 12.2 应采取一切措施防止采样过程的污染和其他可能对样本的污染。 12.3 测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。 13、检测频率：1 次/3 个月。 14、附录附录《沉降菌测试记录》 15、历史修订记录和原因版本号 01 第 4 页共 9 页修订原因新订修订日期附录沉降菌测试记录沉降菌测试记录编码：SOP-ZL-HJ-006-01-R1 测试区域测试依据测试日期测试状态培养温度测试房间现场操采样点布房间编号作人员置类型数 ab PLES123 PLES124 PLES125 PLES126 PLES127 PLES128 PLES129 PLES130 PLES131 PLES132 PLES133 PLES138 PLES139 PLES140 PLES141 PLES142 PLES143 PLES144 测试人员培养基用量培养时间报告日期沉降菌菌落数/cfu 测点 1 测点 2测点 3测点 4 符合规定是□否□ 是□否□ 是□否□ 是□否□ 是□否□ 是□否□ 是□否□ 是□否□ 是□否□ 是□否□ 是□否□ 是□否□ 是□否□ 是□否□ 是□否□ 是□否□ 是□否□ 是□否□ 更鞋间男一更女一更男二更女二更手消毒间外用酊剂线酊剂配制间酊剂灌装间预留间 1 溶液剂灌装间理瓶、洗瓶间瓶子暂存间洗衣整衣间消毒液配制间不合格品存放洁具存放间模具存放间第 5 页共 9 页容器存放容器洗涤内包材存放间溶液剂配制间半固体配制间废弃间中检室中间站 PLES145 PLES146 PLES147 PLES148 PLES149 PLES150 PLES151 PLES152 是□否□ 是□否□ 是□否□ 是□否□ 是□否□ 是□否□ 是□否□ 是□否□ 是□否□ 是□否□ 是□否□ 是□否□ 是□否□ 是□否□ 是□否□ 是□否□ 称量