Toll样受体4在佐剂性关节炎模型大鼠外周血单核细胞中的表达及意义
To I I样受体4在佐剂性关节炎模型大鼠外周 血单核细胞中的表达及意义 作者:张殿增,孟列素,王红英 【摘要】目的研究佛氏完全佐剂性关节炎(AIA)大鼠外周血单核细 胞(PBMC)对 Toll 样受体 4(Toll-likereceptor4, TLR4)、TLR4mRNA 的 表达及其与关节炎评分的关系。方法流式细胞仪测定CD14+TLR4+细胞 占CD14+细胞的比例和TLR4-PE的平均荧光强度(MIF) ; Northernblot 法测定PBMCTLR4mRNA的表达量。比较造模后15d与正常对照组和造模 后25d时CD14+TLR4+/CD14+、MIF及其TLR4mRNA表达量的差异,并用 Mann-WhiteyU检验分析关节炎评分与TLR4MIF的相关性。结果在造模 后 15d, CD14+TLR4+/CD14+、TLR4MIF 和 PBMCTLR4mRNA 的表达较正常 对照组和造模后25d明显增高(P0.01),而且TLR4MIF与关节炎的 评分有明显的相关性(15d: r=0. 826, P0.01; 25d: r=0. 688, P0.05) o 但造模后 25d , CD14+TLR4+/CD14+、TLR4MIF 和 PBMCTLR4mRNA的表达与正常对照组和造模前相比无统计学意义 (P0.05)o结论TLR4与AIA发病有密切关系,提示固有免疫反应 在类风湿性关节炎(RA)及其他自身免疫性疾病的发病中有重要的作 用。 【关键词】佐剂性关节炎;大鼠;Toll样受体4;外周血单核细 ABSTRACT:ObjectiveTodemonstratetheroleofinnateimmunityre actioninrheumatoidarthritisandotherautoimmunediseasesbystudy ingtheexpressionoftoll-likereceptor4(TLR4)byperipheralbloodm ononuclearcell(PBMC)inratswithadjuvant-inducedarthritis (AIA) andanalyzingtherelationshipbetweenexpressionofTLR4byPBMCands coreofarthritisseverity. sBoththeproportionofCD14+TLR4+ cellsinCD14+cellsandthemeanintensityoffluorescence(MIF)ofTLR 4+cellswereanalyzedbyflowcytometry. ExpressionofTLR4mRNAbyPBM CwasdeterminedbyNorthernblot. CD14+TLR4+/CD14+ratio, TLR4MIFan dexpressionofTLR4mRNAbyPBMCinthemodelgroupatl5daysafterAIAwe recompared, respectively, withnormalcontrolgroupandmodelgroupa t25days. ThecorrelationbetweenTLR4MIFandscoreofarthritissever itywasanalyzedbyMann-WhiteyUtest. ResultsCD14+TLR4+/CD14+rati o, TLR4MIFandTLR4mRNAexpressioninmodelgroupatl5daysafterAIAwe reobviouslyincreasedcomparedwiththoseincontrolandmodeIgroups at25days(P25d:r= 0.688,P0. 05), butnosignificantdifferenceinmodelgroupat25d aysafterAIA(Prat;toll-likereceptor 4;peripheralbloodmonocyte Toll样受体(Toll-likereceptor, TLR)属于I类跨膜蛋白的受体 家族,目前在人体已经发现和确定的有10种,鼠类有11种。TLR通 过识别病原微生物及其细胞壁的类脂类保守序列——病原相关分子模 式(pathogenassociatedmolecularpattern, PAMP),介导宿主先天性免 疫反应,并激活后天获得性免疫反应。TLR4是表达于除T、B淋巴细 胞和NK细胞以外的所有免疫细胞的表面,对PAMP具有广谱识别功能 [1]。近来的研究发现,葡萄球菌的细胞壁不能使TLR信号传导连接 蛋白缺乏的小鼠产生关节炎[2], TLR4缺乏小鼠关节炎的严重程度明 显减轻[3],在小鼠关节内注射TLR配体可使之产生严重的关节炎 [4-7],在类风湿关节炎(RA)患者的关节内存在由微生物产生的TLR 配体。由此我们推测,TLR信号传导系统在RA的发生和发展过程中起 着重要的作用。因此,在本研究中,我们通过检测RA小鼠模型外周血 单核细胞(PBMC)表面TLR4及其mRNA的表达情况,并分析其与关节炎 严重程度的关系,阐明TLR在RA发病和进展中的作用。 1材料与方法 1.1实验动物及模型建立 体重为150-200g的SD品系大白鼠,雄性,由西安交通大学医学 院实验动物中心提供。群居笼养,供丸剂饲料和自来水,自由摄食饮 水。造模时于大鼠尾巴根部注射弗氏完全佐剂,诱发类似于人类RA 的关节炎,根据动物耳部、尾部结节的数目和足跖关节肿胀度,按0-4 级评分(Score) [8]0 1. 2主要试剂和仪器 CD14-FITC和TLR4-PE单克隆抗体分别购自Genemylnc和 SantaCruz生物技术公司;RT-PCR所用的酶及其试剂盒购自北京天为 时代科技有限公司。FACSCalibur型流式细胞仪为美国 BactonDikenson公司产品;ABIPRISM型