Toll样受体4在佐剂性关节炎模型大鼠外周血单核细胞中的表达及意义

To I I样受体4在佐剂性关节炎模型大鼠外周 血单核细胞中的表达及意义 作者张殿增，孟列素，王红英 【摘要】目的研究佛氏完全佐剂性关节炎AIA大鼠外周血单核细 胞PBMC对 Toll 样受体 4Toll-likereceptor4, TLR4、TLR4mRNA 的 表达及其与关节炎评分的关系。方法流式细胞仪测定CD14TLR4细胞 占CD14细胞的比例和TLR4-PE的平均荧光强度MIF ； Northernblot 法测定PBMCTLR4mRNA的表达量。比较造模后15d与正常对照组和造模 后25d时CD14TLR4/CD14、MIF及其TLR4mRNA表达量的差异，并用 Mann-WhiteyU检验分析关节炎评分与TLR4MIF的相关性。结果在造模 后 15d, CD14TLR4/CD14、TLR4MIF 和 PBMCTLR4mRNA 的表达较正常 对照组和造模后25d明显增高Plt ;0.01,而且TLR4MIF与关节炎的 评分有明显的相关性15d r0. 826, Plt;0.01； 25d r0. 688, Plt;0.05 o 但造模后 25d , CD14TLR4/CD14、TLR4MIF 和 PBMCTLR4mRNA的表达与正常对照组和造模前相比无统计学意义 Pgt;0.05o结论TLR4与AIA发病有密切关系，提示固有免疫反应 在类风湿性关节炎RA及其他自身免疫性疾病的发病中有重要的作 用。 【关键词】佐剂性关节炎；大鼠；Toll样受体4；外周血单核细 ABSTRACTObjectiveTodemonstratetheroleofinnateimmunityre actioninrheumatoidarthritisandotherautoimmunediseasesbystudy ingtheexpressionoftoll-likereceptor4TLR4byperipheralbloodm ononuclearcellPBMCinratswithadjuvant-inducedarthritis AIA andanalyzingtherelationshipbetweenexpressionofTLR4byPBMCands coreofarthritisseverity. sBoththeproportionofCD14TLR4 cellsinCD14cellsandthemeanintensityoffluorescenceMIFofTLR 4cellswereanalyzedbyflowcytometry. ExpressionofTLR4mRNAbyPBM CwasdeterminedbyNorthernblot. CD14TLR4/CD14ratio, TLR4MIFan dexpressionofTLR4mRNAbyPBMCinthemodelgroupatl5daysafterAIAwe recompared, respectively, withnormalcontrolgroupandmodelgroupa t25days. ThecorrelationbetweenTLR4MIFandscoreofarthritissever itywasanalyzedbyMann-WhiteyUtest. ResultsCD14TLR4/CD14rati o, TLR4MIFandTLR4mRNAexpressioninmodelgroupatl5daysafterAIAwe reobviouslyincreasedcomparedwiththoseincontrolandmodeIgroups at25daysPlt0. 01, andagoodcorrelationbetweenTLR4MIFandscor eofarthritisseveritywasobserved15dr0. 826, Plt0. 01;25dr 0.688,Plt;0. 05, butnosignificantdifferenceinmodelgroupat25d aysafterAIAPgt0. 05. ItindicatedthatTLR4participatedinthep athogenesisofrheumatoidarthritis. ConclusionTLR4expressedbyPB MCiscloselyassociatedwithpathogenesisandpathophysiologyofrhe umatoidarthritis, whichsuggeststhatinnateimmunityresponseplay sanimportantroleinpathogenesisofRAandotherautoimmunediseases KEYWORDSadjuvant-inducedarthritis;rat;toll-likereceptor 4;peripheralbloodmonocyte Toll样受体Toll-likereceptor, TLR属于I类跨膜蛋白的受体 家族，目前在人体已经发现和确定的有10种，鼠类有11种。TLR通 过识别病原微生物及其细胞壁的类脂类保守序列病原相关分子模 式pathogenassociatedmolecularpattern, PAMP,介导宿主先天性免 疫反应，并激活后天获得性免疫反应。TLR4是表达于除T、B淋巴细 胞和NK细胞以外的所有免疫细胞的表面，对PAMP具有广谱识别功能 [1]。近来的研究发现，葡萄球菌的细胞壁不能使TLR信号传导连接 蛋白缺乏的小鼠产生关节炎[2], TLR4缺乏小鼠关节炎的严重程度明 显减轻[3],在小鼠关节内注射TLR配体可使之产生严重的关节炎 [4-7],在类风湿关节炎RA患者的关节内存在由微生物产生的TLR 配体。由此我们推测，TLR信号传导系统在RA的发生和发展过程中起 着重要的作用。因此，在本研究中，我们通过检测RA小鼠模型外周血 单核细胞PBMC表面TLR4及其mRNA的表达情况，并分析其与关节炎 严重程度的关系，阐明TLR在RA发病和进展中的作用。 1材料与方法 1.1实验动物及模型建立 体重为150-200g的SD品系大白鼠，雄性，由西安交通大学医学 院实验动物中心提供。群居笼养，供丸剂饲料和自来水，自由摄食饮 水。造模时于大鼠尾巴根部注射弗氏完全佐剂，诱发类似于人类RA 的关节炎，根据动物耳部、尾部结节的数目和足跖关节肿胀度，按0-4 级评分Score [8]0 1. 2主要试剂和仪器 CD14-FITC和TLR4-PE单克隆抗体分别购自Genemylnc和 SantaCruz生物技术公司；RT-PCR所用的酶及其试剂盒购自北京天为 时代科技有限公司。FACSCalibur型流式细胞仪为美国 BactonDikenson公司产品；ABIPRISM型