覆盆子鉴别与含量测定方法学确认方案

标准技术规程 LOGO 覆盆子鉴别与含量测定 方法学确认方案 页码 1 / 19 文件编码STP-AMQ-001-P 版 本 号00 覆盆子鉴别与含量测定覆盆子鉴别与含量测定 方法学确认方案方法学确认方案 文件审批文件审批 起 草 人 审 核 人 批 准 人 部部门门 质量部 质量部 质量部 姓姓名名 XXX XXX XXX 签签名名日日期期 年月日 年月日 年月日 标准技术规程 LOGO 覆盆子鉴别与含量测定 方法学确认方案 页码 2 / 19 文件编码STP-AMQ-001-P 版 本 号00 1 1、目的、目的 本试验对覆盆子鉴别与含量测定检验方法进行确认，为了确保检验数据的科学 性、准确性和可靠性，制定本确认方案，以确定建立的鉴别与含量测定检验方法能够 对该产品进行准确的检验，为我司化验室以后的覆盆子检验方法提供依据。 2 2、范围、范围 本方案适用于我公司覆盆子鉴别与含量测定检验方法的确认。 3 3、职责、职责 职务岗位姓名职责 1.确认方案及报告的审核；确保方案及报告内容符合 质量部部 长 GMP 及检测要求。 XXX2.组织实施确认工作， 确保确认工作严格按照方案实施； 3.确认过程中偏差和变更的审核，组织确认过程中发生 的偏差的调查； 小组 成员 QC 主任 QC XXX XXX 负责确认方案及确认报告的起草，确认实施记录的审核 按照确认方案进行确认工作，填写记录，并判定是否符 合认可标准要求 组长 4 4、确认依据文件、确认依据文件 《中国药典》2015 年版 5 5、确认程序、确认程序 5.1 先决条件的确认 5.1.1 仪器经过校准确认 所需仪器经过校准并在有效期内，确认记录见附表 01。 5.1.2.人员培训确认 确认小组人员参加了本方案的培训，以及仪器的操作、维护和保养培训、偏差处 理、变更控制等 SOP 的培训，确认记录见附表 02。 5.1.3 相关 SOP 的确认 制定仪器操作、校验、维护和保养标准程序并批准，确认记录见附表 03。 标准技术规程 LOGO 覆盆子鉴别与含量测定 方法学确认方案 页码 3 / 19 文件编码STP-AMQ-001-P 版 本 号00 5.1.4 药品的确认 确认方案确认过程中使用的药品符合规定，并在有效期内。确认记录见附表04。 5.2 鉴别方法学确认 专属性： 供试品溶液制备取山柰酸-3-O-芸香糖苷含量测定项下供试品溶液，即得。 对照品溶液制备取椴树苷对照品，加甲醇制成每 1ml 含 0.1mg 的溶液，即得。 阴性溶液制备照供试品溶液制备方法除取样品外，同法制成阴性溶液。 测定照《薄层色谱法标准操作规程》试验，吸取上述供试品溶液与阴性溶液各 5μ l，及对照品溶液 2μ l，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水-甲 酸（90∶4∶4∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝溶液，在 105℃ 加热 5 分钟，在紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的 位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性液在相应位置上不显斑点（见薄层色谱图 05-1） 。 确认记录见附表 05。 5.3 含量测定方法学确认 5.3.1 鞣花酸含量测定 5.3.1.1 检查方法： 照《高效液相色谱法标准操作规程》测定。 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.2% 磷酸溶液（15∶85）为流动相；检测波长为254nm。理论板数按鞣花酸峰计算应不低 于 3000。 对照品溶液的制备取鞣花酸对照品适量，精密称定，加 70%甲醇制成每 1ml 含 5μ g 的溶液，即得。 供试品溶液的制备取本品粉末（过四号筛）约 0.5g，精密称定，置具塞锥形 瓶中，精密加入70%甲醇 50ml，称定重量，加热回流1 小时，放冷，再称定重量，用 70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置5ml 量瓶中，用70% 甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10μ l，注入液相色谱仪，测 定，即得。 标准技术规程 LOGO 覆盆子鉴别与含量测定 方法学确认方案 页码 4 / 19 文件编码STP-AMQ-001-P 版 本 号00 本品按干燥品计算，含鞣花酸（C 14H6O8）不得少于 0.20%。 5.3.1.2 系统适用性确认 5.3.1.2.1 色谱条件 高效液相色谱仪 色谱柱 流速 检测波长 柱温 进样量 运行时间 5.3.1.2.2 溶液配制 名称配制方法 分别量取乙腈 （色谱纯） 与超纯水， 以乙腈-0.2%磷酸溶液 （15∶ 流动相85） 的比例混合， 用 0.45µm 水系微孔滤膜滤过， 超声脱气 10 min， 即得。必要时可根据实际使用情况调整配制溶液的体积。 空白溶剂样品处理用 70%甲醇溶液。 取鞣花酸对照品适量， 精密称定， 加 70%甲醇制成每 1ml 含 5μ g 对照品溶液的溶液，即得。 平行制备 2 份，分别为对照品溶液 1、2。 取本品粉末（过四号筛）约 0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中， 精密加入 70%甲醇 50ml，称定重量，加热回流 1 小时，放冷，再 供试品溶液 称定重量，用 70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取 续滤液 1ml， 置 5ml 量瓶中， 用 70%甲醇稀释至刻度， 摇匀， 滤过， 取续滤液，即得。 平行制备 2 份，分别为供试品溶液 1、2。 5.3.1.2.3 试验操作 XXXXX Aglilent TC-C18(2) 250*4.6mm 5um 1.0ml/min 254nm，UV 检测器 25℃ 10μ l 30min 标准技术规程 LOGO 覆盆子鉴别与含量测定 方法学确认方案 页码 5 / 19 文件编码STP-AMQ-001-P 版 本 号00 待仪器稳定后，按下列进样序列注入高效液相色谱仪，记录色谱图，以鞣花酸峰 面积计算 5 针对照品溶液 1 的 RSD；按外标法以对照品溶液 1 的鞣花酸峰面积计算对 照品溶液 2 的回收率。 序号 1 2 3 样品名称 空白溶剂 对照品溶液 1 对照品溶液 2 进样体积（ul） 5 5 5 进样针数 1 5 2 5.3.1.2.4 系统适用性回收率 按以下公式计算对照品溶液 2 的回收率： Rc R21  A R21 M R1 C R1 AM R1 C R1100%Rc R22 R22100% A R1 M R2 C R2 AMC R1R2R2 式中： A R1、AR21、AR22：分别为对照品溶液 1 连续 5 针的平均峰面积和对照品溶液 2 第一针和第二针的峰面积； M R1、MR2：分别为对照品 1、2 的称样量； C R1 和 C R2：分别为对照品 1、2 中鞣花酸的含量； Rc R21 和 Rc R22：分别为对照品溶液 2 第 1 针和第 2 针的回收率； 5.3.1.2.5 可接受标准 5 针对照品溶液 1 鞣花酸主峰的保留时间的 RSD 均不大于 2.0%，鞣花酸主峰面积 的 RSD 均应不大于 1.0%；对照品溶液 2 的回收率应在 98.0%～102.0%。理论板数按鞣