儿童川崎病急性期淋巴细胞亚群的变化与意义
儿童川崎病急性期淋巴细胞亚群的变化与意义 【摘要】目的:观察川崎病儿童急性期外周血淋巴细胞亚群的变化, 以探讨儿童川崎病的发病机制。方法:选择在本院最终确诊为川崎病的219 例患儿作回顾性分析,106例健康体检儿童作为对照组,应用流式细胞术 检测川崎病患儿治疗前及健康对照组儿童外周血淋巴细胞亚群CD3+细胞、 CD3+ CD4+细胞、CD3+CD8+细胞、CD16+ CD56+细胞、CD 19+细胞的百分率 以及CD4+/CD8+的比值。结果:与健康对照组相比,川崎病患儿外周血CD19+ 细胞的百分率、CD4+/CD8+比值均明显升高(P〈0. 01)、而CD3+CD8+细胞、 CD 16+ CD56+细胞的百分率则明显下降(P〈0. 01),但CD3+ CD4+细胞百分 率并无明显改变(P=0. 24);以本院淋巴细胞亚群的正常参考值为基准, 川崎病儿童组急性期CD19+细胞升高的比例极高,为90.9% (199/219), 而在健康对照组中仅仅为10.4% (11/106),两组比较差异有统计学意义 (P0.05),家长均知情同意。 1.2检测方法取清晨空腹静脉血2 mL,用乙二胺四乙酸(EDTA)钾 盐抗凝,各取100 UL,分别加CD3-化青素(Cy5)、CD4-异硫氤酸荧光素 (FITC)、CD8-藻红蛋白(PE)、CD19-APC, CD16CD56-藻红蛋白荧光抗体 各15 uL,对照管加同型荧光标记的鼠抗人IgG,放置室温避光孵育15〜 20 min,加溶血素 500 u L 溶血 10 min,用 0. 01 mol/L、pH 7. 4 的 PBS 洗 涤(1500 r/min, 5 min) 2 次后,应用美国 Beckman Coulter 公司 Epics XL-MCL型流式细胞仪进行测定。 1.3统计学处理应用SPSS 19.0统计软件对所得数据进行统计分析, 计量资料用(x + s)表示,组间比较采用2个独立样本的t检验,率的比 较采用 字2检验,P〈0.05为差异有统计学意义。 2结果 川崎病儿童组急性期CD3+、CD3+CD8+、CD16+CD56+、CD19+细胞的百 分率以及CD4+/CD8+比值分别与健康儿童组比较差异均有统计学意义 (P<0.01);但CD3+ CD4+细胞的百分率两组间比较差异无统计学意义 (P=0. 24)。见表1。同时笔者发现在以本院淋巴细胞亚群的正常参考值为 基准值时,川崎病患儿急性期CD19+细胞百分率升高的比例极高,为90. 9% (199/219),而在健康对照组中仅仅为10.4% (11/106),两组比较差异有 统计学意义(P<0.01)o 3讨论 川崎病的发病机制至今尚未完全阐明,目前多数学者认为本病是在一 定遗传学背景下由感染触发的免疫性血管炎,其中免疫学的异常十分重 要,近年来较多的研究表明川崎病患儿存在免疫失衡,但结果并不完全统 O CD19+抗原是B淋巴细胞表面的特异性标志,B细胞分化为浆细胞后可 分泌免疫球蛋白进而介导体液免疫,Giordani等[5]研究发现川崎病患儿 急性期CD19+B细胞百分率和绝对值均明显升高,在应用丙种球蛋白治疗 后恢复至正常水平。本研究中也发现川崎病患儿在急性期CD19+细胞较健 康对照组明显升高,而且以本院正常参考值为基准值时,绝大多数川崎病 患儿急性期的CD19+细胞均高于正常,提示CD19+细胞参与了川崎病的发 病过程。有研究显示在川崎病急性期,大量IgA浆细胞浸润血管壁,认为 可能是病毒类抗原由黏膜组织侵入机体后导致的异常免疫反应[6],笔者 认为川崎病儿童急性期外周血中CD19+细胞升高或是因为这样的异常免疫 反应促使骨髓中合成大量的B细胞并迁移至组织中进一步分化为IgA浆细 胞。在既往的相关研究中有学者发现川崎病患者急性期血液中免疫球蛋白 升高,这进一步支持CD19+细胞的异常升高参与了川崎病的发病,但也有 研究显示川崎病患者血中IgG降低。川崎病的高发年龄是5岁以下,这个 年龄段的儿童免疫群球蛋白的水平本身就因为年龄的变化而有较大变动 [7] 。所以任何不考虑年龄偏倚因素来分析川崎病免疫球蛋白水平的异常 在方法学上均存有一定的问题,且这样的偏倚在做资料分析时也很难避 免,这与目前尚缺乏大规模儿童的免疫球蛋白水平调查有一定关系。所以 关于川崎病儿童的外周血免疫球蛋白水平的变化应在有相当规模的儿童 的免疫球蛋白水平调查基础上考虑年龄因素后再进行分析可能会有更令 人信服的结果。CD4+与CD8+细胞的平衡在维持免疫稳态中起着重要 作用,CD4+细胞可以促进免疫反应,而CD8+细胞则可抑制免疫反应。一般 情况下,CD4+/CD8+比值维持一定的动态平衡,保持机体免疫功能稳定, 如果CD4+/CD8+比值发生改变,则引起免疫功能的紊乱。本研究结果显示 川崎病患儿在急性期CD4+/CD8+比值明显增高,提示这可能导致机体的免 疫调节失衡,从而导致免疫损伤,参与川崎病的发病。 在本研究中,笔者发现川崎病急性期CD8+细胞也明显减少,提示CD8+ 细胞也参与川崎病的发病,CD8+细胞作为具有免疫抑制效应的细胞,其减 少可导致免疫的过度激活,同时也导致CD4+/CD8+比值升高,加剧免疫调 节的失衡,从而参与川崎病的免疫损伤,另外,尚有研究发现在川崎病患 者血管壁中有CD8+细胞浸润,这或是