HPLC法测定蜜炼甘草良咽含片中总皂苷含量
HPLC法测定蜜炼甘草良咽含片中总皂昔含 量 【摘要】目的建立HPLC法测定蜜炼甘草良咽含片中总 皂昔的含量。方法 采用HPLC法。以AgilentZ0RBAXSB-C18 (250mmX4. 6mm, 5um)为色谱柱;流动相:0.02%磷酸溶 液:乙月青(80: 20);流速:1. Oml/min;检测波长:205nmo 结果 总皂昔(以人参皂昔Re计)在800-6400ug之间呈良 好,线性关系回归方程:Y=82476. 250X-318. 56, r=0. 9993 (n=5);平均回收率为97. 1%, RSD=1. 15% (n=6)。结论本 法分离度好,专属性强,准确度高,可用于测定蜜炼甘草良 咽含片中总皂昔的含量。 【关键词】HPLC法;蜜炼甘草良咽含片;总皂昔;含 量 蜜炼甘草良咽含片是以乌梅、罗汉果、青果、金银花等 为主要原料制成的保健食品,而罗汉果中的总皂昔具有清咽 润喉的功效,目前《保健食品检验与评价技术规范》(2003 年版)紫外分光光度法测定中总皂昔的含量,试剂气味刺激, 操作复杂,结果不够准确。本文采用HPLC法测定蜜炼甘草 良咽含片中总皂昔的含量,操作简单,准确。 1仪器与试药 岛津LC-20AT型高效液相色谱仪,岛津SPD-20A紫外检 测器,岛津SIL-20A自动进样器,CT0-10AS色谱工作站。 METTLER AE 240电子天平,JAC-300超声波清洗机。 蜜炼甘草良咽含片(批号2011 09 06, 2011 12 02, 2012 01 04)人参皂昔Re对照品(中国药品生物制品检定所), 乙月青为色谱纯,其他为分析纯,水为超纯水。 2方法与结果 2. 1色谱条件 色谱柱:AgilentZ0RBAXSB-C18色谱柱 (250mmX4. 6mm, 5um);流动相:0. 02%磷酸溶液:乙腊(80: 20);流速:1. Oml/min;检测波长:205nm;进样量:20ul; 柱温:30°Co理论板数按人参皂昔Re计算不低于2000o 2.2溶液的制备精密称取人参皂昔Re对照品 400. 03mg,置10ml的量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度, 制成40mg/m 1对照品贮备液。精密称取供试品(相当于人参 皂昔ReO. 2g),置25ml的量瓶中,加水适量,超声30分钟, 加水稀释至刻度,滤过,精密量取续滤液5ml,用水饱和正 丁醇萃取3次,每次20ml,合并正丁醇液,蒸干,残渣用甲 醇溶解并移至10ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,用0.45um 微孔滤膜过滤,即得供试品溶液。 2.3方法学考察线性关系的考察:精密量取人参皂昔 Re (40mg/ml)对照品贮备液 0.2, 0.4, 0. 8, 1. 2, 1.6. ml, 分别置10ml的量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀。按上述 色谱条件,分别进样20ul,以进样量为横坐标(X),峰面积 为纵坐标(Y),得回归方程:Y=82476. 250X-318. 56, r=0. 9993 (n=5)。结果表明,在800-6400 u g范围内,人参皂昔Re 峰面积值与进样量有良好的线性关系。 精密度实验:精密量取对照品贮备溶液1ml,置10ml的 量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,重复进样5次, 测定其峰面积,结果RSD分别为0.59%,表明仪器精密度良 好。 稳定性实验:取供试品溶液(批号2012 01 04)别于0, 2, 4, 6及8h,分别进样20 ul,测得供试品中人参皂昔 Re峰面积值并计算。结果RSD为1.62% (n=5),实验表明, 供试品溶液在8h内稳定。 重复性实验:取同一批供试品溶液5份,依法测定峰面 积。结果RSD为0.85%,表明本方法重复性良好。 空白干扰试验:按溶液制备方法制备不含罗汉果的阴性 对照溶液,按上述色谱条件测定,结果在阴性对照溶液中, 与人参皂昔Re保留时间处无色谱峰出现。 加样回收率实验:精密量取6份已知含量的供试品(批 号2012 01 04) 2ml,分别加入人参皂昔Re (4mg/ml)对照 品溶液0. 5ml, 1.0ml, 1. 5ml各2份,按上述供试品制备方 法和色谱条件,制备加样回收供试品溶液并注入高效液相色 谱仪,回收率平均值为97. 1%, RSD为1. 15% (n=6)o结果加 样回收良好。 供试品含量测定:取3批供试品,按供试品溶液制备方 法制备供试液,用0. 45 um微孔滤膜过滤,取续滤液20ul, 记录色谱峰峰面积,以外标法计算,测定人参皂昔Re的含 量。结果批号 2011 09 06, 2011 12 02, 2012 01 043 批供 试品人参皂昔Re含量分别为3. 95, 4. 32, 3. 80mg/go 3讨论 用HPLC法测定蜜炼甘草良咽含片中总皂昔的含量,同 紫外分光光度法比较,快速,准确,重现性好。 本法在样品提取方法中曾试用过正丁醇,75%乙醇,以 及通过Amberlite-XAD-2大孔树脂等几种方法,实验结果表 明用正丁醇提取的样品回收率高。 提取次数考察:按照溶液制备的测定方法,分别用水饱 和正丁醇提取1, 2, 3, 4, 5次,依次测定。结果表明提取 3次以后,人参皂昔Re总皂昔基本提尽。 参考文献 [1] 伍毅.高效液相色谱测定复方田七滴丸中人参皂昔 Rel 含量[J].中国药房,2005, 16 (22): 1737. [2] 罗云,金城,李果,等.高效液相色谱法同时测定 姜参胶囊中人参皂昔Rgl及Re的含量[J].中国药房,2007, 6 (18): 451.