HPLC法测定蜜炼甘草良咽含片中总皂苷含量

HPLC法测定蜜炼甘草良咽含片中总皂昔含 量 【摘要】目的建立HPLC法测定蜜炼甘草良咽含片中总 皂昔的含量。方法 采用HPLC法。以AgilentZ0RBAXSB-C18 250mmX4. 6mm, 5um为色谱柱；流动相0.02磷酸溶 液乙月青80 20；流速1. Oml/min；检测波长205nmo 结果 总皂昔以人参皂昔Re计在800-6400ug之间呈良 好,线性关系回归方程Y82476. 250X-318. 56, r0. 9993 n5；平均回收率为97. 1, RSD1. 15 n6。结论本 法分离度好，专属性强，准确度高，可用于测定蜜炼甘草良 咽含片中总皂昔的含量。 【关键词】HPLC法；蜜炼甘草良咽含片；总皂昔；含 量 蜜炼甘草良咽含片是以乌梅、罗汉果、青果、金银花等 为主要原料制成的保健食品，而罗汉果中的总皂昔具有清咽 润喉的功效，目前保健食品检验与评价技术规范2003 年版紫外分光光度法测定中总皂昔的含量，试剂气味刺激, 操作复杂，结果不够准确。本文采用HPLC法测定蜜炼甘草 良咽含片中总皂昔的含量，操作简单，准确。 1仪器与试药 岛津LC-20AT型高效液相色谱仪，岛津SPD-20A紫外检 测器，岛津SIL-20A自动进样器，CT0-10AS色谱工作站。 METTLER AE 240电子天平，JAC-300超声波清洗机。 蜜炼甘草良咽含片批号2011 09 06, 2011 12 02, 2012 01 04人参皂昔Re对照品中国药品生物制品检定所， 乙月青为色谱纯，其他为分析纯，水为超纯水。 2方法与结果 2. 1色谱条件 色谱柱AgilentZ0RBAXSB-C18色谱柱 250mmX4. 6mm, 5um；流动相0. 02磷酸溶液乙腊80 20；流速1. Oml/min；检测波长205nm；进样量20ul； 柱温30Co理论板数按人参皂昔Re计算不低于2000o 2.2溶液的制备精密称取人参皂昔Re对照品 400. 03mg,置10ml的量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度， 制成40mg/m 1对照品贮备液。精密称取供试品相当于人参 皂昔ReO. 2g,置25ml的量瓶中，加水适量，超声30分钟， 加水稀释至刻度，滤过，精密量取续滤液5ml,用水饱和正 丁醇萃取3次，每次20ml,合并正丁醇液，蒸干，残渣用甲 醇溶解并移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45um 微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。 2.3方法学考察线性关系的考察精密量取人参皂昔 Re 40mg/ml对照品贮备液 0.2, 0.4, 0. 8, 1. 2, 1.6. ml, 分别置10ml的量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。按上述 色谱条件，分别进样20ul,以进样量为横坐标X,峰面积 为纵坐标Y,得回归方程Y82476. 250X-318. 56, r0. 9993 n5。结果表明，在800-6400 u g范围内，人参皂昔Re 峰面积值与进样量有良好的线性关系。 精密度实验精密量取对照品贮备溶液1ml,置10ml的 量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，重复进样5次， 测定其峰面积，结果RSD分别为0.59,表明仪器精密度良 好。 稳定性实验取供试品溶液批号2012 01 04别于0, 2, 4, 6及8h,分别进样20 ul,测得供试品中人参皂昔 Re峰面积值并计算。结果RSD为1.62 n5,实验表明， 供试品溶液在8h内稳定。 重复性实验取同一批供试品溶液5份，依法测定峰面 积。结果RSD为0.85,表明本方法重复性良好。 空白干扰试验按溶液制备方法制备不含罗汉果的阴性 对照溶液，按上述色谱条件测定，结果在阴性对照溶液中， 与人参皂昔Re保留时间处无色谱峰出现。 加样回收率实验精密量取6份已知含量的供试品批 号2012 01 04 2ml,分别加入人参皂昔Re 4mg/ml对照 品溶液0. 5ml, 1.0ml, 1. 5ml各2份，按上述供试品制备方 法和色谱条件，制备加样回收供试品溶液并注入高效液相色 谱仪，回收率平均值为97. 1, RSD为1. 15 n6o结果加 样回收良好。 供试品含量测定取3批供试品，按供试品溶液制备方 法制备供试液，用0. 45 um微孔滤膜过滤，取续滤液20ul, 记录色谱峰峰面积，以外标法计算，测定人参皂昔Re的含 量。结果批号 2011 09 06, 2011 12 02, 2012 01 043 批供 试品人参皂昔Re含量分别为3. 95, 4. 32, 3. 80mg/go 3讨论 用HPLC法测定蜜炼甘草良咽含片中总皂昔的含量，同 紫外分光光度法比较，快速，准确，重现性好。 本法在样品提取方法中曾试用过正丁醇，75乙醇，以 及通过Amberlite-XAD-2大孔树脂等几种方法，实验结果表 明用正丁醇提取的样品回收率高。 提取次数考察按照溶液制备的测定方法，分别用水饱 和正丁醇提取1, 2, 3, 4, 5次，依次测定。结果表明提取 3次以后，人参皂昔Re总皂昔基本提尽。 参考文献 [1] 伍毅.高效液相色谱测定复方田七滴丸中人参皂昔 Rel 含量[J].中国药房,2005, 16 22 1737. [2] 罗云，金城，李果，等.高效液相色谱法同时测定 姜参胶囊中人参皂昔Rgl及Re的含量[J].中国药房，2007, 6 18 451.