4%多聚甲醛的配制
4%多聚甲醛的配制: 0.1M PBS配制 80g NaCl 2g KCl 14.4g Na2HPO4 2.7g KH2PO4 溶于800ml蒸馏水中,用HCl调整溶液的pH值至7.4,最终加蒸馏水定容至1L即可。 在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌(至少20分钟),保存存于室温或4℃冰箱中,在放置磁力搅拌棒的容器中,将4克多聚甲醛(EM级)溶解于100ml PBS,加入数滴NaOH,在通风厨中60℃加热(打开瓶盖)使溶解,冷却至室温, 用HCl调整溶液的pH值至7.4,运用前簇新配制. 4%多聚甲醛固定液: 用途:进行免疫组织化学方法探讨时常选用该固定液。动物灌注固定及后固定(动物器官经该液灌注后,然后取材,再用该液浸泡2-24小时)也常选该固定液固定。 试剂: 多聚甲醛 40g PBS0.1 mol/L PH 7.4 500 ml 混合后加热至60℃,搅拌并滴加1N NaOH 至清亮为止,冷却后加PBS 至总量1000 ml。 注固定时间24小时。 我们试验室始终沿用的4%多聚甲醛固定液(用于固定鼠或者兔的脑组织标本)的配方是: 多聚甲醛(粉末状):40g 磷酸二氢钠:2.965g 磷酸氢二钠:29g 蒸馏水:1000ml 然后一块放到三角烧瓶中,在磁力搅拌器上加热(60℃)振荡24小时。 原来始终用的挺好,配出来也很清亮。 但是这几次也是用同样的方法配出来后,在加热时是清亮的,但是瓶底有不少不溶的杂质。等不再加热,室温后,溶液就混浊了。再加热到60度又清亮了。再冷却到室温后又混浊了。 不知道为啥?请高手指引一二,不胜感谢 4%多聚甲醛固定液里头的陪法有点小技巧:多聚甲醛是教易溶于碱性条件下的,先加多聚甲醛和氢二钠,干脆在通风状况下加热溶解,一般15到20分钟就可以,也许放置20分钟后再加二氢钠,溶解后,调PH直到7.2左右即可,最终别遗忘放DEPC. 其实武汉博士德就有4%多聚甲醛固定液卖的,我们以前都是自己配,一是麻烦,二是要用到DEPC,有毒而且易挥发,还带香味,闻到后喉龙就不舒适.后来就干脆找他们买了,便利便宜,省事,最主要的,他们专业点,东西好用! 你要考虑以下几过因素: 1.蒸馏水干净. 2.三角烧瓶干净. 3.试剂没问题. 多聚甲醛就是很难溶解,你把它放在37度温箱里若干天再去看它会有惊喜。以前用过磁力搅拌棒转一上午都不行,放在一边过几天再看就溶解了。 假如要求中性多聚甲醛就用pbs或者用磷酸氢二钠+二氢钠,假如不要求中性用水就可以啦 我要做免疫组化试验。用ABC法,DAB显色。 组织的固定液,查外文资料用的都是4%多聚甲醛/0.1M PBS。但是试验室的老师说,是用0.01M的PBS配制,不知道是不是一样的? 还有就是冲洗液,我查的英文资料都是用0.1M PBS。但是试验室老师说是0.01M PBS。 不知道大家对这个又没有阅历。 固定用0.1M PBS,冲洗用0.01M PBS pbs 0.1M的PBS Nacl 8.5克 Na2HPO4.12H2O 30.8克 NaH2PO4.2H2O 2.8 克 双蒸水 定容至1000ml 0.1M PBS缓冲液的配制: Nacl: 4g Kcl: 0.1g Na2HPO4.12H2O: 1.445g KH2PO4l: 0.1g 用500ml 去离子水溶解,5.6%NaCO3调PH至7.2左右 假如只单纯看看HE的话时间倒无所谓,但假如试验还要做免疫组化、原位杂交等,那么最好不要超过24小时,否则就等着吧,哈哈。