试验室常用试剂缓冲液配制方法一览表

实验室常用试剂缓冲液配制方法一览表 实验常用试剂、缓冲液的配制方法 1、1MTri-HCl□组份浓度 1MTri-HCl（pH7.4，7.6，8.0）□配制量 1L □配置方法 1.称量 121.1gTri 置于 1L 烧杯中。 2.加入约 800mL 的去离子水，充分搅拌溶解。3.按下表量加入浓盐酸 调节所需要的 pH 值。pH 值浓 HCl7.4 约 70mL7.6 约 60mL8.0 约 42mL4.将 溶解定容至 1L。 5.高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定 pH 值，因为 Tri 溶液的 pH 值随温度的变化差很大，温度每升高 1℃，溶 液的 pH 值大约降低 0.03 个单位。 2、1.5MTri-HCl□组份浓度 1.5MTri-HCl（pH8.8）□配制量 1L □配置方法 1.称取 181.7gTri 置于 1L 烧杯中。 2.加入约 800mL 的去离子水，充分搅拌溶解。3.用浓盐酸调 pH 值至 8.8。4.将溶液定容至 1L。 5.高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定 pH 值，因为 Tri 溶液的 pH 值随 温度的变化差异很大，温度每升高 1℃，溶液的 pH 值大约降低 0.03 个单 位。 3、10 某 TEBuffer□组份浓度 100mMTri-HCl，10mMEDTA（pH7.4， 7.6，8.0）□配制量 1L □配置方法 1.量取下列溶液，置于 1L 烧杯中。 1MTri-HClBuffer（pH7.4，7.6，8.0）100mL500mMEDTA（pH8.0） 20mL 2.向烧杯中加入约 800mL 的去离子水，均匀混合。3.将溶液定至 1L 后，高温高压灭菌。4.室温保存。 4、3M 醋酸钠□组份浓度 3M 醋酸钠（pH5.2）□配制量 100mL □配置方法 1.称取 40.8gNaOAc3H2O 置于 100～200mL 烧杯中，加入 约 40mL 的去离子水搅拌溶解。2.加入冰乙酸调节 pH 值至 5.2。3.加入去 离子水将溶液定容至 100mL。 4.高温高压灭菌后，室温保存。 5、PBSBuffer□组份浓度 137mMNaCl，2.7mMKCl，10mMNa2HPO4， 2mMKH2PO4□配制量 1L □配置方法 1.称量下列试剂，置于 1L 烧杯中。 NaCl8gKCl0.2gNa2HPO41.42gKH2PO40.27g2.向烧杯中加入约 800mL 的去离 子水，充分搅拌溶解。3.滴加 HCl 将 pH 值调节至 7.4，然后加入去离子 水将溶液定容至 1L。 4.高温高压灭菌后，室温保存。 注意：上述 PBSBuffer 中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充 1mMCaCl2 和 0.5mMMgCl2。6、10M 醋酸铵□组份浓度 10M 醋酸铵□配制量 100mL □配置方法 1.称量 77.1g 醋酸铵置于 100～200mL 烧杯中，加入约 30mL 的去离子水搅拌溶解。 2.加去离子水将溶液定容至 100mL。3.使用 0.22μm 滤膜过滤除菌。 4.密封瓶口于室温保存。 注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。7、Tri-HCl 平 衡苯酚□配置方法 1.使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用 于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时 也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如 醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA 和 DNA 的交联等。因此，苯酚的质量对 DNA、RNA 的提取极为重要，我们推荐使 用高质量的苯酚进行分子生物学实验。 2.操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套 及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应 用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。3.苯酚平衡：因为在酸性 pH 条件下 DNA 分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其 pH 值达到 7.8 以上，苯酚平衡操作方法如下： ①液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈现结晶状态。从 冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水 浴中使苯酚充分溶解。 ②加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度 0.1％。该化合物是一种 还原剂、RNA 酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色。 有助于方便识别有机相。 ③加入等体积的 1MTri-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌 15 分钟， 静置使其充分分层后，除去上层水相。④重复操作步骤③。 ⑤加入等体积的 0.1MTri-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌 15 分 钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。⑥重复操作步骤⑤，稍微残留 部分上层水相。⑦使用 pH 试纸确认有机相的 pH 值大于 7.8。⑧将苯酚置 于棕色玻璃瓶中 4℃避光保存。 8、苯酚/氯仿/异戊醇□配置方法 1.说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/异戊醇 （25：24：1）。氯仿可使蛋白（25：24：1）质变性并有助于液相与有机 相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。 2.配置方法：将 Tri-HCl 平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24：1） 均匀混合后，移入棕色玻璃瓶中 4℃保存。 9、10％（W/V）SDS□组份浓度 10％（W/V）SDS□配制量 100mL □配置方法 1.称量 10g 高纯度的 SDS 置于 100～200mL 烧杯中，加入 约 80mL 的去离子水，68℃加热溶解。 2.滴加数滴浓盐酸调节 pH 值至 7.2。3.将溶液定容至 100mL 后，室 温保存。10、2NNaOH□组份浓度 2NNaOH□配制量 100mL□配置方法 1.量取 80mL 去离子水置于 100～200mL 塑料烧杯中（NaOH 溶解过程 中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂）。 2.称取 8gNaOH 小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。3.待 NaOH 完 全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100mL。4.将溶液转移至塑料容 器中后，室温保存。11、2.5NHCl□组份浓度 2.5NHCl□配制量 100mL □配置方法 1.在 78.4mL 的去离子水中加入 21.6mL 的浓盐酸 （11.6N），均匀混合。2.室温保存。 12、5MNaCl□组份浓度 5MNaCl□配制量 1L □配置方法 1.称取 292.2gNaCl 置于 1L 烧杯中，加入约 800mL 的去 离子水后搅拌溶解。 2.加去离子水将溶液定容至 1L 后，适量分成小份。3.高温高压灭菌 后，4℃保存。 13、20％（W/V）Glucoe□组份浓度 20％（W/V）Glucoe 2 □配制量 100mL □配置方法 1.称取 20gGlucoe 置于 100～200mL 烧杯中，加入约 80mL 的去离子水后，搅拌溶解。 2.加去离子水将溶液定容至 100mL。3.高温高压灭菌后，4℃保存。 14、SolutionI□组份浓度 25mMTri-HCl（pH8.0），10mMED