细菌室工作流程

细菌室工作流程简介 一、标本接种与涂片染色 （一）标本的接种： ⑴培养基选择及接种方式： 标本类型培养基组合接种方式 痰、咽拭子血平皿+中国蓝平皿+流感嗜血杆菌平皿三区划线法 尿血平皿+中国蓝平皿血：直、曲线法，中：三区划 线法 分泌物血平皿+中国蓝平皿三区划线法 大便 SS 平皿+TCBS 平皿三区划线法 输液液体、腹水、普通肉汤管直接倾倒 胆汁、胃液、脓液等 血、脑脊液、骨髓、血培养瓶用注射器注入 胸水、关节液 培养类别选择性培养基接种方式 真菌沙氏培养基直接划线 淋球菌巧克力淋球菌培养基直接划线 结核杆菌罗氏结核菌培养管直接划线 L—型细菌高渗肉汤培养管直接接种 霍乱弧菌碱性蛋白胨培养管直接接种 ⑵血培养瓶选择如下： 培养瓶瓶的颜色抽血量（ml） 编辑版 word 标准需氧培养瓶蓝色 5—10 标准厌氧培养瓶紫红色 5—10 中和抗生素需氧培养瓶绿色 5—10 中和抗生素厌氧培养瓶橙黄色5—10 小儿血培养瓶浅黄色 1—2 结核杆菌血培养瓶黑色 5—10 （二）标本涂片和染色 1、看湿片（未染色片） ： ⑴正常人体的下呼吸道是无菌的，上呼吸道有正常菌群栖居。下呼吸道 标本来源有多种：痰、支气管肺灌洗吸出液、气管抽出液或刷子、肺穿 刺或活组织等。 痰标本在接种前需涂片镜检，以确认留取的标本是否有临床意义。在低 倍镜下计数每低倍视野白细胞和上皮细胞的平均数目， 按照以下标准判 定标本是否适合做培养： 白细胞上皮细胞是否适合 A：＞25＜10是 B：＞25＜25是 C：＜10＞25否 不合格的标本应电话告诉临床科室重留标本。 ⑶霍乱弧菌（投标样动力，运动似流星） 2、革兰氏染色： ⑴涂片革兰氏染色找细菌： 革兰氏阳性菌： 球菌 （G+C） 、 杆菌少 （G+b） 编辑版 word 革兰氏阴性菌：杆菌（G-b） 、球菌少（G-C） ⑵涂片革兰氏染色找真菌：找菌丝、孢子 ⑶菌群分析：大便标本球、杆菌比例。 备注：加德纳尔氏菌是细菌性阴道症的主要致病菌之一，此症有如下特 点： 1)阴道排出物过多； 2)阴道 PH＞4.5； 3)阴道上皮细胞被 G-小 b 覆盖形成为线索或线球细胞； 4)KOH 试验阳性：阴道分泌物滴加10%KOH 后，立即出现鱼腥味和氨 味； 3、抗酸染色： 查找抗酸杆菌。如结核杆菌、麻风杆菌。 4、墨汁染色： 查找新型隐球菌。特点：有荚膜，夹膜折光性强。 5、看菌落形态： 1.肉眼看： 血平皿上： 有脐窝状的可能是草绿色链球菌， 微黄色可能是奈瑟氏菌， 干燥的可能是真菌，乳白色的可能是葡萄球菌，湿润的可能是肠球菌。 中国蓝上：微黄色可能是奈瑟氏菌，有选择性地促进革兰氏阴性菌生 长，发酵型革兰氏阴性杆菌因分解乳糖能力不同， 在此平皿上的菌落颜 色不同。 流感嗜血杆菌平皿上：微黄色可能是奈瑟氏菌， 编辑版 word （三）转种： 1.阳性血培养瓶：1）涂片革兰氏染色：找到细菌→向临床科室报告； 未找到细菌→暂不报告，待转种生长后再报； 2）转种：血平皿、中国蓝平皿。 2.肉汤管：1）培养 3 天后仍然透明清亮：转种血平皿一个； 2）浑浊：转种血平皿、中国蓝平皿各一个。 二、细菌鉴定（视标本、科室而定） （一）标本培养的菌落计数及有意义菌落的筛选 1、痰： （1）菌落计数 1）只有第一区生长，计103/ml； 2）第一、二区生长，第三区不长，计105/ml； 3）三个区均生长，计 107/ml； （2）菌落筛选 1）＜103/ml ：视科别而定，除ICU、CCU、急诊科、老年科和呼吸科 危重病号外，一般报告为：无致病菌生长； 2）＝103/ml ：除非细菌生长较纯或可能为葡萄球菌需进一步处理外一 般报告为：无致病菌生长； 3）＞103/ml ：①根据菌落形态将其中意义不大的标本报告单发出，一 般报告为：无致病菌生长；微黄色报告奈瑟氏菌； 血平皿上有脐窝状可能为草绿色链球菌，需做如下鉴定： 4）血平皿：草绿色链球菌做OPTOCHIN； 编辑版 word 中国蓝：真菌（YBC）转沙氏、种芽管。 2、尿： 1）菌落计数： 定量接种环涂抹法：用10μl 定量接种环取一环尿液在血平皿上做均匀 划线接种，置于 35℃24h 培养，计数生长的菌落数，再乘以100，即为 每毫升菌落数。菌落生长过多不可计数时，报告＞105cfu/ml。 2）一般情况下细菌数不会超过103cfu/ml，诊断泌尿系感染的细菌学标 准是：菌落计数≥105cfu/ml。 3、前列腺液： 1）密集生长→分纯（选乳白色的菌落）→鉴定 2）偶有生长→报告为：无致病菌生长 3）无菌生长→报告为：无细菌生长 4、大便： 中国蓝及 SS 平板：找细小、无色、透明的菌落→KIA 试验 ＋：血清学鉴定 －：报告无致病菌生长 TCBS 平板：黄色菌落→氧化酶：+：O/F 试验：＋：上机药敏 －：报告无致病菌生长 －：很少，可能为梅氏弧菌，报告无 致病菌生长 5、其他标本（血、脑脊液、静脉管等）的细菌鉴定：一般不需计数， 只要有细菌生长（污染菌除外） ，就需进行鉴定处理。 编辑版 word 三、鉴别试验： 1、血平板（链球菌属）细小、圆形、表面光滑、灰白色、半透明 （1）选血平皿上有脐窝状的菌落（可能是草绿色链球菌） ：在血平皿上 做 OPTOCHIN（奥卜托欣）试验：1）＋：报告肺炎链球菌2）－： 报告草绿色链球菌 （2）牛奶美蓝试验：1）＋：粪肠球菌 2）－：手工生化反应组鉴别菌 类 （3）卫星现象（用金黄色葡萄球菌做） ： 1）血平皿：＋：流感或付流感→M-H 平皿：＋：付流感：无致病菌生 长 －：无致病菌生长－：流感 2）细菌与生长因子： 血平皿上有 V+X 因子， （药平皿）M-H 平皿上有 V 因子。 细菌名称所需生长因子 流感嗜血杆菌Ⅴ+Ⅹ 付流感嗜血杆菌Ⅴ 杜克氏菌Ⅹ 2、涂片： 阳性杆菌→上机 BAC 卡 阳性球菌→做触酶（H2O2） 阴性杆菌→做氧化酶（OX） 真菌（YBC）→转沙氏（分纯） 、种芽管（看是不是白色念珠菌） 编辑版 word 可疑金黄色葡萄球菌要加做凝固酶加以确定 3、用 KOH（氢氧化钾）拉丝试验（鉴别阴性菌还是阳性菌） 拉丝＋：是阴性菌拉丝－：是阳性菌 4、触酶（H2O2） ： 先挑取菌落 1 个，加 1 滴 H2O2，马上出现气泡的为阳性， 其次为阴性。 在革兰氏阳性菌中，链球菌触酶试验阴性，葡萄球菌、微球菌均阴性。 5、凝固酶： 可疑为金黄色葡萄球菌做凝固酶：100ul 血浆＋300ul 生理盐水＋1 个菌 落。 6、上机、药敏： G-b 做氧化酶，G+C 做触酶（CAT） 革兰氏阴性菌 G-b 要做氧化酶（试纸片法） 。 中国蓝上生长 G-b 的菌落（非真菌） ：氧化酶＋：上机GNI 反应卡〇涂 黑→●、革兰氏阴性菌药敏 3 板（①②③） 氧化酶－：上机 GNI 反应卡〇→〇、革 蓝氏阴性菌药敏 4 板（①②③④） 中国蓝不生长 G+C 的白色菌落做触酶：1）＋→凝固酶： 玻片法＋→试管法＋： 报金黄色葡萄球菌、 G＋药敏＋葡萄球菌＋ （OX） 苯唑－：上机 GPI○、G＋药敏＋葡萄球菌＋（OX）苯唑西林 －：上机 GPI○、G＋药敏＋链球菌 2）－：牛奶美蓝 1）＋：粪肠球菌、肠球菌 药敏 编