胭脂红检验操作规程
胭脂红检验操作规程 目 的:建立胭脂红的检验操作规程 范 围:适用于胭脂红的检验 职 责:QC主任及检验员 执行标准:中华人民共和国国家标准GB 4480. 1—94 规 程: 1外观:本品为红色至深红色粉末。 2鉴别: 2. 1试剂 a 无水乙醇(GB/T 678); b 正丁醇(HG/T 3-1012); c 乙酸铉(GB/T 1292): 100g/L 溶液; d 氨水(GB /T 631): 4+96 溶液; e胭脂红标准样品:含量N82. 0%, N60. 0%。 2.2仪器、设备 a分光光度计; b 层析滤纸:1号中速,150mm X 250mm; c 层析缸:100mm X 200mm; d微量进样器:10 U Lo 2. 3操作步骤 2. 3. 1称取0.1g试样,精确至0.01g,溶于100mL水中,呈红色澄清溶液,试样微溶于 乙醇,不溶于油脂,具有酸性染料的特性,能使动物纤维染色。 2. 3. 2称取约0. 001g试样,溶于100mL乙酸铉溶液中,其最大吸收波长为508±2nmo 2. 3.3取试样水溶液做纸上层析,其主色点的Rf值,应与标准样品相同。 纸上层析条件: 展开剂:正丁醇+无水乙醇+氨水溶液=6+2+3。 温度20〜25°C。 试验溶液浓度0. Ig/lOOmLo 试验溶液用量2 u Lo 展开剂前沿上升限度150mm。 3胭脂红含量的测定 3. 1分光光度比色法 3. 1. 1方法提要 将试样与已知含量的标样分别用水溶解后,在最大吸收波长处,分别测其吸光度,然后计 算出试样的含量。 3. 1. 2试剂和材料 胭脂红标准样品:含量N82. 0%, N60. 0%。 3. 1. 3仪器、设备 a. 分光光度计; b, 比色皿:10mm。 3. 1.4操作步骤 a. 胭脂红标样溶液的制备 称取胭脂红标准样品0. 500g,精确至0.0002g,溶于适量水中,移入lOOOmL容量瓶中, 稀释至刻度,摇匀。准确吸取10mL,移入500mL容量瓶中,稀释至刻度,摇匀。 b. 胭脂红试样溶液的制备 称量与操作方法同标样溶液的制备。 c •操作 将标样溶液与试样溶液分别置于10mm比色皿中,在508nm波长处用分光光度计测定各自 的吸光度。以水作参比液。 3. 1. 5计算 胭脂红的质量百分含量(X。按下式计算: Xi= (A/As) X Xs 式中:A一试样溶液的吸光度; As—标样溶液的吸光度; Xs一柠檬黄标准样品的质量百分含量。 4干燥失重:取本品在135°C干燥5小时,减失的重量不得过10. 0% ( QC-S0P-30U-03)o 5水不溶物含量的测定 5.1分析步骤 称取约3g的试样,精确至0.01g,置于500 mL烧杯中,加入50~60°C水250mL使之溶 解,用已在135±2°C烘至恒重的4号砂芯土甘垠过滤,并用热水充分洗涤到洗涤液无色,在 135±2°C恒温烘箱中烘至恒重。 5. 2计算(本品水不溶物不得过0. 20%) 水不溶物的质量百分含量以2)按下式计算: X2= (mi/nio) X 100% 式中:nh—干燥后水不溶物的质量,g; m2—试料的质量,go 6异丙醍萃取物含量的测定 6. 1试剂 a. 异丙醍 b. 盐酸(GB/T 622): 2 + 98, 3 + 7 溶液; c. 氢氧化钠(GB/T 629): 5 g/L、20 g/L、100 g/L 溶液; d. 硫酸亚铁(GB/T 664): c (FeSOQ =0. Imol/L 标准溶液; e. 硫氤酸铉(GB/T 660): c (NH4CNS) =0. Imol/L 标准溶液; f. 三氯化钛标准溶液:c (l/3TiCl3) =0. Imol/L溶液,溶液需新配制,配制方法见附录A (补充件)。 6. 2操作步骤 称取约2 g试样,精确到0. 01g,用水100 mL溶解后,试验溶液移入500 mL分液漏斗中, 加异丙酷40 mL,摇动Imin,静置分层,分出染料水层,置于另一分液漏斗中,留存的异 丙醍,每次用水25mL洗涤,共洗二次,弃去洗涤液,将异丙醍液通过脱脂棉直接滤入已 知质量的150mL磨口锥形瓶中,第一次分出的染料溶液,加入100 g/L氢氧化钠溶液2 mL, 用异丙醍40 mL同上法进行第二次萃取,异丙醍用5 g/L氢氧化钠溶液25mL洗涤一次, 每次用水250mL再洗涤二次,弃去洗涤液,将异丙醍液通过脱脂棉滤入同一锥形瓶中,第 二次分出的染料水溶液,加入5mL盐酸溶液(3 + 7),再用异丙酷40mL进行第三次萃取, 异丙醍液用25mL盐酸溶液(2 + 98)洗涤一次,每次用水25mL再洗涤二次,合并三次异 丙酷萃取液,在80〜85°C水浴中蒸去异丙醍,然后将锥形瓶置于温度为80〜85°C的烘箱 中,烘至恒重。同时以100mL水代替试样溶液,以相同方法做一空白试验。 6. 3计算 异丙酷萃取物的质量百分含量(X。按下式计算: X3= (m4—m5) / m3X 100% 式中:叫一萃取物的质量,g; IDs —空白试验时萃取物的质量,g; IDs—试料的质量,go 7副染料含量的测定 7. 1方法提要 用纸上层析法将各组分分离、洗脱,然后用分光光度法定量。 7. 2试剂和材料 a. 无水乙醇(GB/T678); b. 正丁醇(HG/T 3-1012); c. 丙酮(GB/T 686): 1 + 1 溶液; d. 氨水(HG/T 631): 4 + 96 溶液; e. 碳酸氢钠(GB/T 640)溶液:4g/L溶液。 7. 3仪器、设备 a. 分光光度计; b. 层析滤纸:1号中速,150mmX250 mm; c. 层析缸:240 mm X 300 mm; d. 微量进样器:100 uL; e. 纳氏比色管:50mL,具磨口塞; f. 3号玻璃砂芯漏斗。 7.4操作步骤 7. 4.1纸上层析条件: 展开剂 正丁醇+无水乙醇+氨水溶液= 6 + 2 + 3; 温度20〜25°C。 7. 4. 2试样洗出液的制备 称取1 g胭脂红试样,精确至0. 01g,置于烧杯中,加入适量水溶解后移入100 mL容量瓶 中,稀释至刻度,摇匀,用微量进样器吸取200 UL,均匀地点在离滤纸底边25 mm的一 条基线上,成一直线,使其溶液在滤纸上的宽度不超过5 mm,长度为130 mm,用吹风机 吹干,将滤纸放入层析缸中展开,滤纸底边浸入展开剂液面下10 mm,待展开剂前沿线上 升至150 mm或直到副染料分离满意为止,取出层析滤纸,用吹风机以冷风吹干。 同时用空白滤纸在相同条件下展开(该空白滤纸必须和试样溶液展开用的滤纸在同一张 600 mmX 600 mm的滤纸上相邻部位裁取)。 将各个副染料和在空白滤纸上与副染料相对应的部位的滤纸,按同样大小剪下,并剪成约 5 mmX 15 mm的细条,分别置于50mL的纳氏比色管中,各准确加入丙酮溶液5 mL,摇动3- 5min后