TNF-α及IL-6在扁平苔藓中表达及意义
TNF-cl及IL-6在扁平苔葬中表达及意义 【摘要】目的检测扁平苔葬患者皮损处肿瘤坏死因 子 a (TNF q)和白介素6(IL 6)的表达,探讨其在扁 平苔葬发病过程中的作用。方法 选取30例扁平苔葬组织 和30例正常皮肤组织,采用免疫组织化学技术观察TNF a 和IL 6的表达。结果TNF Q和IL 6在扁平苔葬组中 的表达均高于在正常皮肤组中的表达(P<0 001)且二者在 扁平苔葬皮损处的表达呈正相关(r=0 804,P<0 001) o结 论TNF Q和IL 6的高表达可能参与了扁平苔葬的发病。 【关键词】 扁平苔葬;肿瘤坏死因子Q;白介素6 扁平苔葬(Lichen Plsnus)是一种常见慢性炎症性皮肤 病,目前发病机制和原因仍不十分清楚,其组织病理表现为 基底细胞液化变性,真皮浅层以T淋巴细胞为主的带状浸润, 提示了免疫细胞介导的局部反应。T淋巴细胞在许多细胞因 子的产生中起着重要的作用[1],同时细胞免疫反 应受到各种细胞因子及其受体的调节,因此,这些细胞因子 可能参与了扁平苔葬的病理过程。大量研究发现,白介素 6(IL 6)是自身免疫疾病中的关键炎症因子,而肿瘤坏死 因子 a (TNF Q)在体内细胞因子网络中起着重要的调节 作用,TNF a能上调IL 6及TNF a自身的表达。本研究 通过观察TNF Q和IL 6在扁平苔葬皮损中的表达变化, 进一步揭示它们在扁平苔葬发病机制中发挥的作用。 1资料与方法 1 1 一般资料 病例组30例(男性16例,女性14例), 均为我院皮肤科门诊2011年1月至2012年7月经临床和组 织病理确诊为扁平苔葬的患者,年龄19〜68岁,平均 (42 + 6 42)岁。取材部位为躯干四肢典型皮损,所有病例 近3个月内未用激素、免疫调节剂,均无全身系统性疾病。 对照组30例(男18例,女12例)来源于我院整形外科和普 外科的正常皮肤组织,年龄26~64岁,平均(38 + 8 64)岁, 无任何皮肤病及系统性疾病。两组性别和年龄差异均无统计 学意义。 1 2试验试剂 兔抗人IL 6多克隆抗体由北京博奥 森生物技术有限公司提供,兔抗人TNF a多克隆抗体由武 汉博士德生物技术公司提供,二步法PV 6001免疫组织化 学检测试剂盒及DAB显色试剂盒、PBS缓冲液等试剂均购自 北京中杉金桥生物技术公司。 1 3 试验方法①免疫组化二步法检测组织中 TNF Q和IL 6的表达:所有标本用4%中性缓冲液甲醛 固定,常规乙醇脱水,石蜡包埋和厚4 um连续切片;用蒸 偏水配制新鲜的3%H2 02阻断内源性过氧化物 酶,然后将切片浸入pH6 0、0 01 mol / L的枸椽酸缓冲液 中高压加热抗原修复(两者均加热30s);滴加一抗(兔抗人 TNF a浓缩液稀释为1:100,兔抗人IL 6浓缩液稀 释为1:150),阴性对照用PBS溶液取代一抗进行对比 实验,37C孵育lh,滴加二抗;DAB显色;37C孵育15 min 后苏木素复染,常规脱水、透明、封片。②免疫组化结果判 定:免疫组化结果以胞浆和(或)胞核可见棕黄色颗 粒为阳性,阴性无着色。由于积分光密度值(I0D)与染 色强度成正比,以I0D值代表阳性产物表达的强度。每张切 片随机选取5个高倍视野(X400),采用MIAS2000图像分析 系统分析阳性区域I0D值,测定每个视野的I0D值,取平均 值为该标本的I0D值。 1 4统计学方法数据以均数土标准差(x + s)表示, 采用SPSS 13 0统计软件进行分析,两组间比较采用两样 本t检验,指标间相关性采用Pearson相关析,P<0 05为 差异有统计学意义。 2结果 免疫组化结果显示:在扁平苔葬皮损中,TNF q、IL 6 两者的阳性表达主要分布在表皮角质形成细胞和真皮浅层 淋巴细胞的胞浆中;在正常皮肤组织中呈阴性或弱阳性表 达。两者在扁平苔葬皮损处的表达明显高于在正常皮肤组织 中的表达。差异均有统计学意义(P<0 001)o扁平苔葬皮损 中TNF Q、IL 6的表达呈正相关(r=0 804, P<0 001) o 扁平苔葬组与正常皮肤组之间TNF Q、IL 6的I0D值比 较见表lo 3讨论 大量研究表明,扁平苔葬是T淋巴细胞介导的局部炎症 反应,多种炎症介质参与了扁平苔葬的发病[2] o TNF a基因定位于6号染色体HLA DR基因和HLA B基因 位点之间的HLA III抗原基因簇上,其长度约2 76 kb, 由四个外显子和三个内含子组成。皮肤处的TNF a多由单 核巨噬细胞、角质形成细胞和激活的T淋巴细胞产生,是一 种具有广泛生物活性的细胞因子,同时也是一个免疫反应的 关键性细胞因子,参与机体炎症和免疫应答的调节。TNF a 能增加前炎症细胞因子即IL 1, IL 6, IL 8等合成与释 放。TNF a通过与TNF受体1结合而促进扁平苔葬凋亡 的发生 [3,4]。有研究发现扁平苔葬皮损中TNF a 的表达程度与基底细胞液化有一定关系,表现在有基底细胞 液化处的表皮角质形成细胞和真皮浅层淋巴细胞的TNF a 表达明显增加 [5],而且研究发现扁平苔葬皮损中 TNF a与淋巴细胞浸润的数量有一定的相关性[6], 所以在扁平苔葬炎症反应中,TNF Q发挥着重要作用。 IL 6是由淋巴细胞、单核巨噬细胞等细胞激活后合成 和分泌的多向性细胞因子,它主要参与机体免疫反应、炎症 以及肿瘤等病理生理过程。IL 6与IL 6R结合后导致细胞 浆内JAK激酶的活化,通过JAK STAT信号传递系统发挥其 生物学效应,作为一种促炎症细胞因子,主要功能为刺激T 细胞增殖及CTL(细胞毒性T淋巴细胞)活化,参与炎症反应。 机体在IL 1、TNF Q等细胞因子的刺激下可以产生IL 60 IL 6可以刺激T淋巴细胞、B淋巴细胞等分泌各种炎症介 质,并且有促进B淋巴细胞的成熟分化的作用,这又增加了 IL 1和TNF Q的效应。在炎症反应中IL 6对其他炎症 细胞,如中性粒细胞、单核巨噬细胞等也有趋化作用[7] o这些都体现了 IL 6在机体炎症反应中有着重要的作 用。 Yamamoto等 [8] 研究显示,在口腔扁平 苔葬中,IL 1B和IL 6可以刺激浸润性单核细胞产生更 多的TNF Q,同时IL 1B和GM CSF也可以刺激浸润性 单核细胞产生更多的IL 60 TNF a能上调IL 1、IL 6 及TNF本身的水平 [9], IL 6可增加T细胞IL 2 产生和IL 2R的表达,IL 2和IL 2R的结合诱导杀伤细 胞产生TNF Q。增多的TNF Q介导炎症连锁反应启动, 促进其他细胞因子(如IL 2、IL 6、IL 8)持续释放。这 些因子又增强了 TNF a的作用。另外,TNF a可以上调 多种粘附分子的表达,诱导淋巴细胞持续归巢,导致淋巴细 胞在皮肤局部的持续浸润。IL 6多在细胞受到TNF Q、 IL 1B刺激后产生。本研究显示,TNF a和IL 6通过介 导炎症反应,参与了扁平苔葬的发病。 参考文献 [1] 刘洋,金建秋,等 2型糖尿病伴口腔扁平 苔葬患者唾液白细胞介素6和肿瘤坏死因子