培养基制备试验报告

文档从互联网中收集，已重新修正排版，word 格式支持编辑，如有帮助欢迎下载支持。 培养基制备实验报告培养基制备实验报告 篇一：培养基的制备与灭菌实验报告 陕西师范大学远程教育学院 生物学实验报告 报告题目培养基的制备与灭菌 姓 名 刘 伟 学 号 专 业 生 物 科 学 批次/层次 指导教师 学习中心 培养基的制备与灭菌 一、目的要求 1. 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。 2. 掌握培养基的配置原则和方法。 3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。 二、基本原理 牛肉膏蛋白胨培养基： 是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又 称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖 所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。 高压蒸汽灭菌： 1word 格式支持编辑，如有帮助欢迎下载支持。 文档从互联网中收集，已重新修正排版，word 格式支持编辑，如有帮助欢迎下载支持。 主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的 效果。将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过 加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。待蒸汽将锅内冷空气 从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。此时蒸汽不溢出， 压力增大，沸点升高，获得高于 100℃的温度导致菌体蛋白 凝固变性，而达到灭菌的目的。 三、实验材料 1. 药品： 牛肉膏、蛋白胨、 NaCl、 琼脂、 1mol/L 的 NaOH 和 HCl 溶液。 2. 仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、 试管、烧杯、量筒、三 角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。 3. 其他物品：药匙、称量纸、pH 试纸、记号笔、棉花 等。 四、操作步骤 （一）玻璃器皿的洗涤和包装 1．玻璃器皿的洗涤 玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将三角瓶、试管、培 养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用 自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再 用自来水及蒸馏水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘 干后备用。 2word 格式支持编辑，如有帮助欢迎下载支持。 文档从互联网中收集，已重新修正排版，word 格式支持编辑，如有帮助欢迎下载支持。 2．灭菌前玻璃器皿的包装 （1） 培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可 用报纸将几套培养皿包 成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内， 加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。 （2） 移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花 (勿用脱脂棉)，它的作 用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入 口中。塞入此小段棉花应距管口约 0.5cm 左右，棉花自身长 度约 1~1.5cm。塞棉花时．可用一外围拉直的曲别针、将少 许棉花塞入管口内。棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而 又不使棉花滑下为准。 先将报纸裁成宽约 5cm 左右的长纸条，然后将已塞好棉 花的移液管尖端 放在长条报纸的一端， 约成 45℃角， 折叠纸条包住尖端， 用左手握住移液管身，有手将移液管压紧．在桌面上向前搓 转，以螺旋式包扎起来。上端剩余纸条，折叠打结，准备灭 菌。 （二）液体及固体培养基的配制过程 1．液体培养基配制 （1）称量（假定配制 1000ml 培养基） 按培养基配方比例依次准确地称取 3.0g 牛肉膏、 10.0 g 3word 格式支持编辑，如有帮助欢迎下载支持。 文档从互联网中收集，已重新修正排版，word 格式支持编辑，如有帮助欢迎下载支持。 蛋白胨、5.0gNaCl 放入烧杯（或 1000ml 刻度搪瓷杯）中．牛 肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶 化后倒入烧杯。 （2）溶化 在上述烧杯中先加入少于所需要的水量（如约 700ml） ， 用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解，将药品完全 溶解后，补充水到所需的总体积（ 1000ml） ；如果配制固体 培养基时，将称好的琼脂放人已溶的药品中，再加热溶化， 最后补足所损失的水分。 （3）调 pH 调 pH：一般用 pH 试纸测定培养基的 pH。用剪刀剪出一 小段 pH 试纸，然后用镊子夹取此段 pH 试纸，在培养基中蘸 一下， 观看其 pH 范围， 如培养基偏酸或偏碱时， 可用 1mol/L NaoH 或 1mol/L HCl 溶液进行调节。调节 pH 时，应逐滴加入 NaOH或HCI溶液， 防止局部过酸或过碱， 破坏培养基中成分。 边加边搅拌，并不时用 pH 试纸测试，直至 pH 达 7.4-7.6。 反之，用 1mol／LHCl 进行调节。 2．固体培养基的配制 配制固体培养基时，应将已配好的液体培养基加热煮沸， 再将称好的琼脂(1.5~2％)加 入，并用玻棒不断搅拌，以免糊底烧焦。继续加热至琼 脂全部融化，最后补足因蒸发而失去水分。 4word 格式支持编辑，如有帮助欢迎下载支持。 文档从互联网中收集，已重新修正排版，word 格式支持编辑，如有帮助欢迎下载支持。 （三）培养基的分装 根据不同需要，可将已配好培养基分装入试管或三角瓶 内，分装时注意不要使培养基沾污管口或瓶口，造成污染。 如操作不小心，培养基沾污管口或瓶口时，可用镊子夹一小 块脱脂棉，擦去管口或瓶口的培养基，并将脱脂棉弃去。 1．试管的分装 取一个玻璃漏斗，装在铁架上，漏斗下连一根橡皮管， 橡皮管下端再与另一玻璃管相接，橡皮管的中部加一弹簧夹。 分装时，用左手拿住空试管中部，并将漏斗下的玻璃管嘴插 入试管内，以右手拇指及食指开放弹簧夹，中指及无名指夹 佐玻璃管嘴，使培养基直接流入试管内。装入试管培养基的 量视试管大小及需要而定，若所用试管大小为15×150 mm 时，液体培养基可分装至试管高度 1／4 左有为宜；如分装 固体或半固体培养基时，在琼脂完全融化后，应趁热分装于 试管中。用于制作斜面的固体培养基的分装量为管高1／ 5(约 3—4mI)，半固体培养基分装量为管高的 1／3 为宜。 2．三角瓶的分装 用于振荡培养微生物时，可在 250 m1 用于制作 平板培养基用时，可在 250 m1 三角瓶中加入 150ml 粉(按 2％计算)，灭菌时瓶中琼脂粉同时被融化。 （四）棉塞的制作及试管、三角瓶的包扎 5word 格式支持编辑，如有帮助欢迎下载支持。 文档从互联网中收集，已重新修正排版，word 格式支持编辑，如有帮助欢迎下载支持。 为了培养好气性微生物，需提供优良通气条件，同时为 防止杂菌污染，则必须对通入试管或三角瓶内空气预先进行 过滤除菌。通常方法是在试管及三角瓶口加上棉花塞等。 1．试管棉塞的制作 制棉塞时，应选用大小、厚薄适中的普通棉花一块，铺 展于左手拇指和食指扣成的团孔上，用右手食指将棉花从中 央压入团孔中制成棉塞．然后直接压入试管或三角瓶口。也 可借用玻璃棒塞入，也可用折叠卷塞法制作棉塞。 制作的棉塞应紧贴管壁，不留缝隙，以防外界微生物沿 缝隙侵入，棉塞不宜过紧或过松，塞好后以手提棉塞，试管 不下落为准。棉塞的 2／3 在试管内，1／3 在试管外。目前 也有采用硅胶塞代替棉塞直接盖在试管口上。 将装好培养基并塞好棉塞或硅胶塞的试管捆成一捆，外 面包上一层牛皮纸。用记号笔注明培养基名称及配制日期， 灭菌待用。 2．三角瓶棉塞制作 通常在棉塞