基因工程基础知识填空

河南大学药学院河南大学药学院20102010～～20112011学年第一学期期末测试学年第一学期期末测试专题一专题一基因工程基因工程 1. 1 DNA1. 1 DNA 重组技术的基本工具重组技术的基本工具一、基因工程的基本概念一、基因工程的基本概念 1. 概念：基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过_____________和 ___________等技术，赋予生物以新的 __________，从而创造出更符合人们需要的新的__________和___________。由于基因工程是在 DNA 分子水平上进行设计和施工的，因此又叫做_________________。 2. 基本原理：______________ 3. 理论基础 (1) 不同生物的基因可以拼接的结构基础— —细胞生物的遗传物质都是_______，都是以 _____________为基本单位构成的双链大分子。 (2) 目的基因转入后可以表达的基础——所有生物共用一套__________。 (3) 生物遗传信息的表达都遵循_________。 4. 优点 (1) 目的性强，能_______的改造生物的性状。 (2) 克服________________的障碍。二、限制性核酸内切酶——分子手术刀二、限制性核酸内切酶——分子手术刀 1. 简称：__________。 2. 来源：主要是从__________中分离纯化而来。 3. 功能特点：特异性，即识别双链 DNA 分子某种特定__________，并且使每一条链中 ____________的两个核苷酸之间的 _________断开。 4. 酶切结果：_______末端和_______末端。画出 EcoRⅠ酶切后的结果： ↓ GAATTCGAATTC CTTAAGCTTAAG ↑ 三、三、DNADNA 连接酶——“分子缝合针”连接酶——“分子缝合针” 1. 作用实质：将双链 DNA 片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开了的两个核苷酸之间的________。 2. 作用前提：两个 DNA 分子必须含有 _________。 3. 种类页脚内容页脚内容1 河南大学药学院河南大学药学院20102010～～20112011学年第一学期期末测试学年第一学期期末测试 (1)E·coli DNA 连接酶 ① 来源：___________ ② 功能：只能连接___________ (2) T4DNA 连接酶 ① 来源：____________ ② 功能：既可以连接___________，又可以连接_________，但连接_________时效率比较低。【拓展】比较 DNA 连接酶与 DNA 聚合酶 DNA 连接酶DNA 聚合酶作用都是催化两个核苷酸之间形成实质_______ 是否需模板 ______________ 连接 DNA 链 ____链____链在两个 DNA将_________加到作用片段之间形已存在的核苷酸过程成链上，形成 ______________________ 将两个 DNA 作用结果片段连接成合成___________ __________ 四、基因进入受体细胞的载体——“分子运四、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”输车” 1. 基因工程中最常用的载体——_______ (1) 来源：________等微生物 (2) 结构：裸露的、结构简单、独立于 ___________ 之外，并具有____________的 ___________分子。 2. 基因的载体必须具备的条件 (1) 有______________个限制酶切割位点，供外源 DNA 片段（基因）插入其中。 (2) 能在宿主细胞内_________，或整合到染色体 DNA 上，随染色体 DNA 进行________。 (3) 有特殊的___________，如四环素抗性基因等，供重组 DNA 的鉴定和选择。 (4) 必须是______的，不会对受体细胞有害。 (5) _______适合，以便提取和在体外进行操作。 3. 载体的种类：除质粒外，还有 ____________、__________________等。 4. 在进行基因工程操作中，真正被用作载体的质粒，都是在天然质粒的基础上进行过 _________的。页脚内容页脚内容2 河南大学药学院河南大学药学院20102010～～20112011学年第一学期期末测试学年第一学期期末测试 1. 21. 2基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序一、基因工程的基本操作程序一、基因工程的基本操作程序 1. _____________的获取。 2. _____________的构建。 3. 将目的基因_____________。 4. 目的基因的_____________。二、目的基因的获取二、目的基因的获取 1. 目的基因主要是_________的结构基因。 2．获取目的基因的方法 (1) 从基因文库中获取目的基因 ① 基因文库概念：将含有某种生物不同基因的许多__________，导入_______的群体中储存，各个_______分别含有这种生物的不同的基因，称为基因文库。 ② 基因文库分类：可分为 ______文库和 ________文库(如 cDNA 文库)。 (2) 利用 PCR 技术扩增目的基因 ① PCR 技术是_____________的缩写。PCR 是一项在生物体外 _____________的核酸合成技术。 ② PCR 技术的原理：DNA 的_________。 ③ PCR 扩增的前提：要有一段已知目的基因的_______，以便根据这一序列合成引物。 ④ PCR 扩增的条件： _____、 _____(目的基因)，原料—— _______________(即 dCTP、 dATP、dGTP、dTTP)，耐高温的 __________ 酶(Taq酶)。 ⑤ PCR 扩增的过程 a. 变性：加热到 90-95℃，DNA 受热变性后 ________________ b. 复性（退火）：冷却到 55-60℃，_______ 与____________结合 c. 延伸：加热到 70-75℃，在热稳定的 ____________(Taq酶)的作用下进行延伸 ⑥ 结果：目的基因以____的方式成指数形式扩增。 (3) 人工合成法：如果基因比较___，且 ________，可以通过___________用化学方法直接人工合成。【拓展】 PCR 技术和 DNA 复制的比较 PCR 技术DNA 复制相原理__________________ 同原料__________________ 点条件_____、_____、_____ 不解旋_____解旋_______催化同场所_____复制________ 点酶热稳定的DNA细胞内含有的页脚内容页脚内容3 河南大学药学院河南大学药学院20102010～～20112011学年第一学期期末测试学年第一学期期末测试聚合酶DNA 聚合酶结果在短时间内形形成成_____________