脂肪酶测定SOP_LIP临床意义
文件编号: 脂肪酶测定版本号: 页码:第页共页 1检测原理 当辅助脂肪酶、胆汁盐和氯化钙存在,脂肪酶能催化脂肪酶底物1,2-0-双十二烷基-rac-甘油-3- 戊二酸-(6 -甲基试卤灵)酯的水解(反应图示如下)。通过水解生成不稳定的中间产物戊二酸-6 -甲基试卤灵酯。然后中间产物被H20水解生成游离的甲基试卤灵,在577 nm波长上吸光。用 577/700 nm的双波长反应可测定脂肪酶的活性。反应的比率与样本中脂肪酶的含量成正比。 1, 2-0-双十二烷基-rac-甘油- 脂肪酶1, 2-0-双十二烷基-rac-甘油+ ► 3-戊二酸-(6 -甲基试卤灵)酯戊二酸6 -甲基试卤灵酯(不稳定) 戊二酸6 -甲基试卤灵酯 H20 戊二酸+甲基试卤灵(在577 nm波长上吸光) ► 2标本采集与处理 2. 1采血方法 空腹采不抗凝静脉血2~3mL 2.2标本保存 血清中的脂肪酶在室温下可保持一周的稳定性,在2 ~8 °C下可保持三周的稳定性。 2. 3注意事项 样本的细菌污染可能导致脂肪酶值升高。乙二胺四乙酸、草酸钾、氟化钠和柠檬酸盐己证明对脂 肪酶的测试结果有抑制作用,故不应使用。标本应避免溶血、脂血、黄疸。 3试剂和设备 3. 1试剂 采用西门子医学诊断产品(上海)有限公司提供的试剂盒。 3. 1. 1试剂组成 试剂船1~3孔为脂肪酶底物0.24 mM,胆汁盐10 mM,钠盐,钾盐,酒石酸盐缓冲液1.6 mM,片 剂;4~6孔为三羟甲基氨基甲烷缓冲液50 mM,氯化钙2.0 mM,辅助脂肪酶2. 8 x 105 U/Ld,片剂; 7~8孔为NaOH 0. 53 M,液体。 3. 1.2试剂准备 直接使用。 3. 1.3试剂保存 试剂2~8°C保存,有效期内稳定。 3. 2质控品 美国BIORAD液体多项质控品。 文件编号: 脂肪酶测定版本号: 页码:第页共页 3. 3校准品 西门子校准品。 3.4仪器 SIEMENS DIMENSION Xpand Plus/RxL Max 全自动生化分析系统。 4操作程序 4. 1检测过程流程 签收样品一离心一上机检测一审核报告一签发报告一标本保存。 4. 2样品签收 严格按照标本接收程序签收标本。 4. 3标本处理 以2500~3000r/min,离心6~10min,分离血清上机测定。如不能及时检测,分离血清于2-8°C保存。 4. 4标本检测 4. 4. 1手工编排测试项目:样品按编号装入样品架,主屏幕按FkENTER DATA,在Position处输入样 品所在样品架字母及所在位置号,按enter,在Patient Name处选择性输入病人名字,按enter,在Sample No处输入样品号,按enter,在Tests处使用检验键或检验组合键选择相应项目,根据需要选择相应的 按键改变Mode (按F7:MEXT MODE选择样品管类型)、Priority (按F4:NEXT PRIORITY选择样品的 处理模式)、Fluid (按F8:NEXT FLUID选择标本类型)。 4. 4.2双向条形码标本分离血清后直接运行仪器。 4.4.3运行:输入完毕后按F3:LOAD LIST,确认样品已经装载在样本盘上,按Run键,仪器开始进行 样品检测。 4. 4. 4检验后标本保存 标本检验完成后用采血管原盖盖紧,保存于标本冷藏库内,按日期放好,保存期为7天。 5校准程序 5. 1校准品准备和储存 直接使用,2~8°C保存。 5. 2校准条件 在室内质控失控、更换试剂批号、更换仪器主要配件或进行大保养后均需校准。无特殊情况校准 周期为3个月。 5. 3校准程序 主屏幕按 F5: PROCESS CTRL—Fl: CALIBRATION,按 enter—F2: SET-UP & RUN,按项目键选择所需要 校准的项目名称,选中相应试剂批号LOT,输入操作者姓名Operator、校准液货号Calibrator 文件编号: 月旨肪酶测定版本号: 页码:第页共页 Product和批号Lot,以及最低值校准液在样品架上的位置Start at Position,最后把校准液各个水 平的值按照由低到高的顺序输到对应位置,按F4: ASSIGN CUPS指定样品杯,校准液按顺序排列在样 品架上,按F7: L0AD/RUN-F4: RUN或“RUN”运行键运行校准程序。 6质量控制程序 6. 1质控品准备和储存 质控品为液体,可以直接使用。原包装质控品-10~-70°C可保存到瓶身有效期,未开启2~8°C可保 存90d,开启后2~8°C可保存30d o 6. 2质控水平和分析批长度 每24小至少进行一批,每批2个浓度水平。 6. 3质控操作程序 与4.4标本检测步骤相同,只需要按F4:NEXT PRIORITY将ROUTINE修改成QC状态。 7性能参数 本法线性范围为50~ 1500U/L,对于超过测定线性范围的结果,用酶稀释液对标本进行稀释,输入 稀释因子后再重新检测。 8生物参考区间 114 -286 U/Lo 9临床意义 此酶活力增高常见于急性胰腺炎。 10参考文献 [1] 西门子医学诊断产品(上海)有限公司脂肪酶(LIP)测定试剂说明书。 叶应妩,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程.第3版.南京:东南大学出版社,2006: 431-434o 编写: 审核: 批准: