肌钙蛋白I测定SOP_CTNI临床意义
文件编号: 肌钙蛋白I测定版本号: 页码:第页共页 1检测原理 CTNI方法是基于双抗体夹心原理的一步法酶免疫测定。样本与用心肌肌钙蛋白2分子的特异单克 隆抗体包被的二氧化铭颗粒,和标记了心肌肌钙蛋白T的特异单克隆抗体的结合试剂:碱性磷酸酶 (ALP)]共同孵育,形成颗粒/心肌肌钙蛋白1/结合夹心。自由轲合物可通过磁性分离和清洗来清除。 分离和清洗之后,颗粒/心肌肌钙蛋白T/结合剂夹心转移到比色杯中,在那里,夹心结合的碱性磷 酸酶触发扩增反应。使人造黄素腺嘿吟二核昔酸磷酸(FADP)脱去磷酸,生成黄素腺噂吟二核昔酸 (FAD)。结合到apo D-氨基酸氧化酶(脱辅基的)并将其转换为活化的全D-氨基酸氧化酶。然后每个 全D-氨基酸氧化酶分子生成多个分子过氧化氢(H202),后者在有辣根过氧化物酶(HRP)的条件下, 将3, 5-二氯-2-羟苯璜酸(DCHBS)和4-氨基安替比林(4-AAP)转换为在510 nm处吸光的有色产 品。测定的颜色变化与患者样本中存在的心肌肌钙蛋白T浓度成正比。 cTnl + CrO厂Ab + Fab -ALP ►CrO厂Ab- cTnl- Fab -ALP + CrO厂Ab + Fab -ALP CrO;-Ab- cTnl- Fab -ALP + CrO厂Ab + Fab -ALP 清洗、CrO::-Ab- cTnl- Fab -ALP + CrO厂Ab >(转移到比色杯) FADPCrO〃-Ab- cTnl- Fab -ALP FAD + Pi ► apo D-氨基酸氧化酶FAD」全D-氨基酸氧化酶 D-脯氨酸+ 02全D-氨基酸氧化酶」H202 H2O2 + DCHBS + 4-AAP HRP 「 颜色(在510nm处吸收) 2标本采集与处理 2. 1采血方法 空腹不抗凝静脉血2~3mlo 2. 2标本保存 室温保存,及时送检和检测。样本在2~8°CT可存储14天,在-20 °C下可保存8周。 2. 3注意事项 推荐选用血清。在存在EDTA、柠檬酸盐、草酸盐下采集的血样和含抗凝血剂不足的冷冻血浆,可 能导致铭颗粒的凝结,不可以使用。标本应避免乳糜、溶血、黄疸。 3试剂和设备 3. 1试剂 文件编号: 肌钙蛋白I测定版本号: 页码:第页共页 3. 1. 1试剂组成 试剂船1孔为FADP 0. 056 mg/mL, D-脯氨酸68. 8mg/mL,片剂;2孔为Apo-D-氨基酸氧化酶0. 23 mg/mL,辣根过氧化物酶,过氧化物酶 0.19 mg/mL, DCHBS 3. 9 mg/mL, 4-AAP 1. 18 mg/mL,片剂;5 孔为抗体-Cr02 1.6 mg/mL,片剂;6孔为抗体-碱性磷酸酶,液体;7孔为缓冲液,稳定剂,液体;8 孔为馅片剂稀释液,稳定剂,液体。 3. 1. 2试剂准备 直接使用。 3. 1. 3试剂保存 试剂2~8°C保存,有效期内稳定。 3. 2质控品 美国BIORAD质控液。 3. 3校准品 西门子校准品。 3.4仪器 SIEMENS DIMENSION Xpand Plus/RxL Max 全自动生化分析系统。 4操作程序 4. 1检测过程流程 签收样品一离心一上机检测一审核报告一签发报告一标本保存。 4. 2样品签收 严格按照标本接收程序签收标本。 4. 3标本处理 以2500~3000r/min,离心6~10min,分离血清上机测定。若标本不能及时检测,将分离的血清冷藏 与2-8 °C的冰箱内。 4. 4标本检测 4. 4. 1手工编排测试项目:样品按编号装入样品架,主屏幕按FkENTER DATA,在Position处输入样 品所在样品架字母及所在位置号,按enter,在Patient Name处选择性输入病人名字,按enter,在Sample N。处输入样品号,按enter,在Tests处使用检验键或检验组合键选择相应项目,根据需要选择相应的 按键改变Mode (按F7:MEXT MODE选择样品管类型)、Priority (按F4:NEXT PRIORI?Y选择样品的 处理模式)、Fluid (按F8:NEXT FLUID选择标本类型)。 4. 4.2双向条形码标本分离血清后直接运行仪器。 4. 4.3运行:输入完毕后按F3:LOAD LIST,确认样品已经装载在样本盘上,按Run键,仪器开始进行 文件编号: 肌钙蛋白I测定版本号: 页码:第页共页 样品检测。 4. 4. 4检验后标本保存 标本检验完成后用采血管原盖盖紧,保存于标本冷藏库内,按日期放好,保存期为7天。 5校准程序 5. 1校准品准备和储存 直接使用,2~8°C保存。 5. 2校准条件 在室内质控失控、更换试剂批号、更换仪器主要配件或进行大保养后均需校准。无特殊情况校准 周期为3个月。 5. 3校准程序 主屏幕按 F5: PROCESS CTRL—Fl: CALIBRATION,按 enter—F2: SET-UP & RUN,按项目键选择所需要 校准的项目名称,选中相应试剂批号LOT,输入操作者姓名Operator,校准液货号Calibrator Product和批号Lot,以及最低值校准液在样品架上的位置Start at Position,最后把校准液各个水 平的值按照由低到高的顺序输到对应位置,按F4: ASSIGN CUPS指定样品杯,校准液按顺序排列在样 品架上,按F7: LOAD/RUN—F4: RUN或“RUN”运行键运行校准程序。 6质量控制程序 6. 1质控品准备和储存 质控品为液体,可以直接使用。 6. 2质控水平和分析批长度 每24小至少进行一批,每批2个浓度水平。 6. 3质控操作程序 与4.4标本检测步骤相同,只需要按F4:NEXT PRIORITY将ROUTINE修改成QC状态。 7性能参数 本法线性范围为0. 04 ~ 40. 00ng/mL,对于超过测定线性范围的结果,用样本稀释液进行稀释,输入 稀释因子后再重新检测。 8生物参考区间 0.00 ~ 0.05ng/mL。 9临床意义 血清肌钙蛋白作为一种理想的心肌细胞损伤的特异性标记物,用于急性心肌梗死及各种原因引起 的炎性和非炎性心肌损伤。 10参考文献 文件编号: 肌钙蛋白I测定版本号: 页码:第页共页 [2]叶应妩,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程.第3版.南京:东南大学出版社,2006: 353~354。 编写: 审核: 批准: