PTEN在急性白血病中的表达意义
PTEN在急性白血病中的表达意义 摘要:目的研究急性白血病中PTEN表达意义,分析PTEN在急性白 血病发病机制中作用。方法收集2012年3月〜2013年3月我院血液内科 20例初治急性白血病(除外急性早幼粒细胞白血病)病例、14例骨髓正 常造血(脾功能亢进、缺铁性贫血)病例。通过免疫组化实验方法半定量 分析两组病例PTEN表达水平。结果 急性白血病组中PTEN表达水平明显 低于正常组(P〈0. 05),具有统计学差异。结论PTEN异常表达可能有参与 了急性白血病发生发展。 关键词:急性白血病;PTEN;免疫组化 急性白血病是一种造血干细胞恶性克隆导致正常骨髓造血异常的恶 性血液肿瘤[1]。PTEN基因是已知抑癌基因,本文将通过免疫组化半定量 分析PTEN在急性白血病中表达,从而研究PTEN在急性白血病发病中的作 用。 1资料与方法 1. 1 一般资料本研究选取2012年2月〜2013年2月我院收治的20 例初治急性白血病(除外急性早幼粒细胞白血病)患者作为研究对象,男 14例,女6例,年龄25〜86岁;包括6例急性髓系白血病Ml型、8例急 性髓系白血病M2型、4例急性髓系白血病M5型;所有病例均符合MICM 诊断标准。14例正常对照组包括9例缺铁性贫血、5例脾功能亢进病例。 1. 2方法 1.2.1标本 所有标本均为骨髓活检组织石蜡,切成4um组织切片 1.2.2免疫组化 二甲苯(I、II)中脱蜡,浓度由高到低的乙醇脱苯, 3% H202内源性过氧化物酶阻断,枸檄酸钠修复液高压修复5 min, 一抗 PTEN (北京中杉金桥,工作液),4°C冰箱孵育过夜,复温45 min后加通 用型二抗,室温孵育15 min,滴加DAB显色液,显色10 s,自来水冲洗, 滴加苏木素染色,使用1%盐酸酒精分化1〜3 s,低浓度至高浓度酒精进 行脱水,二甲苯透明,中性树胶封片。 1.3结果判定PTEN蛋白表达于胞浆。采用半定量法分析免疫组化结 果,每张骨髓病理切片随机挑选10个高倍视野(10X40),每个视野计数 超过100个有核细胞,阳性细胞的数N/100即为阳性细胞百分比。根据阳 性细胞所占比例及显色强度综合评分。A分为阳性细胞百分比:0〜10%显 色为0分,11%〜25%为1分,26%〜50%为2分,51%〜100%为3分;B分为 阳性细胞显色强度:未显色或蓝色为0分,浅黄色为1分,棕黄色为2 分,棕褐色为3分。A分+B分为标本积分,积分33分视为高表达,积分 <3分视为低表达。 1.4统计学方法用SPSS 19. 0软件分析所有数据,计数资料以均数土 标准差(x + s)表示,组间通过t检验分析PTEN在急性白血病组、正常 表达差异。 2结果 显微镜下观察PTEN表达阳性细胞的细胞胞浆内淡黄色至棕褐色颗粒。 正常组及急性白血病组PTEN表达,见表1。计数两组PTEN表达积分,对 两组平均值进行统计t检验,见表1。 急性白血病组病例PTEN表达积分平均值与标准差(0. 8300 + 0. 1865) 与正常对照组(2. 7670±0. 4259)相比明显较低,P〈0. 05,两者在统计学 上有显著性差异。 3讨论 急性白血病是血液内科常见恶性肿瘤,是造血干细胞恶性克隆影响骨 髓正常造血,从而引起感染、贫血、出血、外周浸润等症状。急性白血病 平均生存期3个月左右。PTEN (phosphatase and tensin)基因是1997 年被发现,是一个抑癌基因[1]。磷脂酰肌醇-3, 4, 5-三磷酸(PIP3)是 PTEN的底物蛋白。PTEN具有蛋白磷酸酶和脂质磷酸酯酶双重活性,PTEN 蛋白通过脂质磷酸酶活性使PIP3去磷酸化为磷脂酰肌醇-4, 5-二磷酸 (PIP2)从而抑制AKT介导磷脂酰肌醇三磷酸激酶(PI3K)信号通路活化, 从而抑制细胞增殖[2]。有报道指出白血病中出现PTEN基因突变[3]。在 对PTEN突变的斑马鱼研究发现,PTEN基因突变使斑马鱼中PTEN蛋白失活, 造血干细胞可增殖但无法分化为成熟血细胞[4] o人类白血病发病可能与 PTEN有关,本实验通过免疫组化发现PTEN在急性白血病表达较正常组低, 支持PTEN失活参与急性白血病发病。PTEN可能可以帮助临床对急性白血 病的诊断,同时为找出新的治疗提供新思路。 参考文献: [1]Cristofano A D, Pesce B, Cordon-Cardo C, et al. Pten is essential for embryonic development and tumour suppression[J]. Nature genetics, 1998, 19 (4): 348~355. [2] Cully M, You H, Levine A J, et al. Beyond PTEN mutations: the PI3K pathway as an integrator of multiple s during tumorigenesis[J]. Nature Reviews Cancer, 2006, 6 (3): 184-192. [3] Zhang J, Grindley J C, Yin T, Jayasinghe S, et al. PTEN maintains haematopoietic stem cells and acts in lineage choice and leukaemia prevention[J]. Nature, 2006, 441 (7092): 518-522. [4] Choorapoikayil S, Kers R, Herbomel P, et al. Pivotal role of Pten in the balance between proliferation and differentiation of hematopoietic stem cells in zebrafish[J]. Blood, 2014, 123 (2): 184-190. 编辑/肖慧