细胞生物学设计性实验细胞核的分离鉴定.doc

医学细胞生物学设计型实验设计报告 班级 10 级 k-7 班 评分 实验项目： 细胞核的分离与鉴定 实验原理：1、细胞内各种 结构的比重和大小不同，在同一离心 场内其沉降 速度也不同。所以，用差速离心法可将细胞内各种 细胞器及组分分级分离出 来。差速离心法也是用来研究亚细胞成分的化学组成，理化特性及其功能的 主要手段。 2、分离细胞核最常用的方法是将组织制成匀浆，在特定的条件下 进行离心分离，然后分析鉴定。 3、匀浆 是指在低温条件下，将组织放入匀浆器，加入等渗匀浆介 质进行研磨，破碎细胞，使之成为各种细胞器及其包含物的匀浆液。 实验步骤：1、处死：断 头处死小白鼠，手提尾部使其学业尽量流出。 2、取材：迅速开腹取肝，在盛有生理盐水的小 烧杯中反复洗涤， 称取湿重约为 1g 的肝组织放在烧杯中。 3、匀浆 ：加油 8ml 预冷的 0.25mol/L 蔗糖 0.003mol/L 绿化高永夜 于烧杯中，尽量剪碎肝组织，将剪碎的刚组织倒入玻璃匀浆器，是匀浆器下 端侵入盛有冰块的器皿（如冰盘）。左手握持匀浆器，右手将匀浆捣杆垂直插 入管中匀浆，直至看不到明显的组织块。 4、过滤 ： 用 8 层纱布（先用少量生理盐水或蔗糖液润湿纱布）过滤匀浆液于离心管中。 5、离心：在天平上平衡每对离心管，2500r/min 离心 15min ，取上 清液于另一离心管中。 6、涂片：取上清液制一张涂片（涂片 1）。将原离心管中剩余上清 液吹打成沉淀成悬液，另制一张涂片（涂片 2），自然干燥 。 7 、染色：分别在涂片 1 和 2 上低价甲苯胺蓝染液 ，染色 5 到 7 分钟（即滴染）。 8、洗涤 ：冲去染液，晾干。 9、镜检 ：结合实验结果的描述， 镜下观察分析。 注意事项：1.操作规范，防止试剂污染。 2.细胞悬液的涂片制作要轻柔。 3.使用离心机要注意平衡，转速从低到高。 预期结果：低倍镜下找到标本，再换高倍镜，可见肝细胞核已游离出来，被 染成蓝紫色， 圆形，中央有 2 到 4 个甚至更多个深蓝色的核仁。 实验用品：材料：小白鼠肝脏。 试剂：生理盐水、0.25mol/L 蔗糖 0.003mol/L 氯化钙溶液、 1%甲苯胺兰染液。 仪器设备：显微镜、普通离心机、天平、离心管、滴管、 玻璃漏斗、量筒、25ml 烧杯、解剖剪、镊子、冲洗瓶、纱布、伯乐 匀浆器、载玻片、盖玻片、染色盘架。设计组名单： 教师： 日期： 姓 名 学 号 姜 俊 1020150738 曾 祥 兵 1020150739 冯 国 周 1020150744 黄 丹 阳 1020150750 杜 徉 睿 1020150751