鼻咽癌的检测指标

鼻咽癌的检测指标 鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma，NPC)是我国最常见的头颈部恶性 肿瘤，其发病机制不十分明确，与其他肿瘤一样，鼻咽癌的发生是一 个多因素、多阶段、多步骤的复杂过程，它与病毒、环境因素紧密相 关，也与生物遗传、化学、物理因素有密切关系。鼻咽癌相关基因的 研究被认为是可以揭开鼻咽癌发生、发展秘密的钥匙，基因药物也有 希望成为鼻咽癌治疗的有效方法之一，所以鼻咽癌相关基因的研究一 直就是基因研究的热点。笔者就鼻咽癌几个重要的相关基因Bcl-2、 LMP-1、p53、nm23-H1、p16，简要综述如下。 1Bcl-2 基因家族 目前已发现的 Bcl-2 基因家族成员至少有 16 个，按功能分为两类， 一类是抑制细胞凋亡的：如 Bcl-2、Bcl-xL、Bcl-w、Bfl-1、Bag-1、 mcl-1 等；另一类是促进细胞凋亡的：如Bcl-G、mtd、Bax、Bcl-xS、 Bad、Bak、Bid、Bik、Blk、hrk 等。Bcl-2 基因家族成员众多，与鼻 咽癌密切相关的并且研究较多的有 Bcl-2、Bax 和 Bcl-xL。 Bcl-2 基因是迄今研究最深入的凋亡调控基因之一，Bcl-2 基因位于 18 号染色体上，含有 3 个外显子和 2 个内含子。Bcl-2 蛋白的高表达 与特异性的 t(14;18)(q24;q21)染色体易位有关。许多实验表明，Bcl- 2 基因主要抑制细胞凋亡和延长细胞寿命。目前认为Bcl-2 抗凋亡作用 的可能机制有以下几种 1：作为细胞器的膜稳定蛋白，保护质膜不受过 氧化物损伤；抑制正在发生凋亡的细胞内质网中Ca2+的释放，改变细 胞器的 Ca2+以抑制凋亡；拮抗凋亡促进基因 Bax，抑制和阻止细胞色 素 C 对 caspase-3 的活化；调节 p53 蛋白、细胞周期调控蛋白等蛋白 延缓细胞凋亡。Bax 含有 6 个外显子，编码三种蛋白质：Bax-α、Bax- β、Bax-γ。Bcl-2 和 Bax 序列有 45%的同源性，在体内 Bax 可形成同 源二聚体 Bax/Bax，当 Bcl-2 高表达时，可与 Bax 竞争，形成 Bax/Bcl-2 异源二聚体。Bax 主要是促进细胞凋亡。传统认为 Bcl-2 和 Bax 通过互相拮抗来调节细胞的凋亡，但近来的研究表明Bcl-2 和 Bax 也可能独立地调节凋亡。 王晖等 2 发现，Bcl-2、Bax 基因蛋白在鼻咽癌组织中表达的阳性率分 别为 68%、76%；正常鼻咽黏膜组织表达阳性率分别为12%、16%，两者 差异具显著性(P0.05)，但代表 Bax、Bcl-2 两个基因在细胞中表达比例的 Bax/Bcl-2 比例与鼻咽癌对放疗的敏感性相关(P0.05)，Bax/Bcl-2 比 例1 的鼻咽癌对放疗敏感性较高。 人体组织中有两种 Bcl-x 基因：Bcl-xL 和 Bcl-xS。研究发现 Bcl-xL 可以抑制细胞凋亡，而 Bcl-xS 则可以防止细胞过度表达 Bcl-2，从而 促进细胞凋亡，Bcl-xL 和 Bcl-xS 分别通过抑制和促进细胞凋亡来调节 细胞的凋亡。闵玲等 3 通过建立裸鼠人鼻咽癌模型，接种肿瘤细胞后 将 Bc1-xL 反义寡核苷酸(ASODN)、序列对照寡核苷酸(ODN)皮下注射进 行治疗，利用 ASODN 序列特异性地与 Bc1-xL 的 mRNA 结合而阻断 mRNA 翻译，调节由基因到蛋白质的信息传递，抑制蛋白质的表达。结果发 现 Bcl-xLASODN 治疗组裸鼠鼻咽癌的生长受到明显抑制，抑瘤率为 41.7%，其对应的 Bcl-xLmRNA 和蛋白水平明显降低，与对照组相比， 差异有显著性(P0.01)。李继霞等 4 采用人 Bcl-xL 基因的小干扰 RNA(siRNA)序列，通过荧光素标记试剂盒标记 siRNA；再将 siRNA 转入 人鼻咽癌低分化上皮细胞株 CNE-2Z 细胞株，以观察 siRNA 抑制 Bcl-xL 表达的效果。发现各 siRNA 转染组 Bcl-xLmRNA 表达水平有不同程度的 下调，下调范围在 10%～70%之间，而在未转染对照组内 Bcl-xLmRNA 表 达水平无明显改变；细胞生长增殖抑制率在一定范围内具有剂量依赖 性(剂量增加，抑制率增高)和时间依赖性；各浓度 siRNA 转染组可不 同程度诱导 CNE-2Z 细胞凋亡。 2 潜伏膜蛋白 1(LMP-1)基因 潜伏膜蛋白 1(LMP-1)基因是众多的 EB 病毒基因中已证实的致癌基因， 定位于细胞膜上，是一种转化蛋白，在细胞的信号传导及细胞骨架形 成过程中具有重要作用。研究表明，LMP-1 可通过活化 NF-kB，下调 p16 促进细胞生长，抑制细胞凋亡 5；LMP-1 还可以通过 NF-kB 等细胞 信号传导途径促 B 淋巴细胞和上皮细胞的增殖；LMP-1 同时还能抑制肿 瘤细胞分化，促进肿瘤细胞的转移和逃避宿主的免疫反应。KimHS 等 6 的研究表明，CD99 调控机体对 NPC 细胞的免疫反应，LMP-1 可通过下 调淋巴基质中 CD99 的表达，促进 NPC 在周围淋巴结的转移。 李刚等 7 研究表明导入有效抑制 LMP-1 表达的小干扰 RNA(siRNA)序列 后，鼻咽癌 C611 细胞中 LMP-1mRNA 水平下降 90%以上，重复转染可使 有效干扰时间延长至 96h。LMP-1 基因抑制后，EB 病毒阳性的 C611 细 胞增殖速度最多可下降至 32.9%；细胞周期在 G0-G1 期受阻。在同样处 理下，EB 病毒阴性的 HNE22 细胞的生长则未受到影响。谢莹等 8 发现 咽拭子法检测 EB 病毒(EBV)潜伏膜蛋白 1(LMP-1)，LMP-1 基因作为鼻 咽癌的检测指标，灵敏度为 91.7%，特异性为 95.6%，可用于鼻咽癌诊 断。 3P53 基因 P53 基因位于 17p13.1，由 10 个内含子和 11 个外显子组成。野生型 P53(wtP53)是一种与细胞分裂周期有关的核磷酸化蛋白。wtP53 的抗肿 瘤机制主要有两个方面：一是通过调节细胞周期，P53 的调节功能主要 体现在对 G1 或 G2/M 期校正点的监测，与转录激活作用密切相关。另 一方面，P53 可以通过启动细胞凋亡过程发挥抑瘤作用，P53 的几个相 关转录靶位已经分离鉴定。通过 Bax/Bcl-2，Fas/Apol，IGF2Bp3 等蛋 白，P53 可完成对细胞凋亡的调控作用。Bcl-2/Bax 是一对凋亡调节基 因。P53 可以上调 Bax 的表达水平以及下调 Bcl-2 的表达共同完成促进 细胞凋亡作用 9。刘宇等 10 发现鼻咽鳞癌中 P53 和 Bcl-2 基因蛋白表 达的阳性率分别为 76.56%(49/64)和 89.06%(57/64)，其阳性表达率与 鼻咽鳞癌颈部淋巴结转移有关，均 P=0.01；而与患者的年龄、性别、 临床分期和临床近期疗效无关。同时发现P53 蛋白表达阳性组中 Bcl-2 蛋白表达阳性率显著高于阴性组，差异有显著性(P0.01)，提示这两 种基因都参与了鼻咽鳞癌细胞凋亡的调节，并通过对鼻咽鳞癌细胞凋 亡的抑制最终导致肿