CDK4、P16在中耳胆脂瘤中的表达及意义

CDK4、P16在中耳胆脂瘤中的表达及意义 【摘要】观察细胞周期蛋白依赖性激酶CDK4、细胞周 期蛋白依赖性激酶抑制因子P16在中耳胆脂瘤上皮的表达情 况，探讨它们在胆脂瘤发病机制中的作用。方法：采用免疫 组织化学技术SABC法检测CDK4、P16在中耳胆脂瘤35例、 正常外耳道皮肤20例中的表达，并结合胆脂瘤对听小骨骨 质破坏程度，采用软件进行统计学分析。结果：CDK4、P16 均表达于胆脂瘤上皮的棘细胞层、颗粒层和角质层，阳性率 分别为％、%,高于对照组(前者P=，后者P=)。二者在胆脂瘤 上皮的表达有一定的相关性，PV；与中耳胆脂瘤听小骨骨质 破坏程度之间无明显相关性，P＞。结论：CDK4与P16在中 耳胆脂瘤发生中是共同而非单独起作用的，从细胞周期的角 度可反映胆脂瘤上皮细胞过度增殖的同时也增强负调控因 子来抑制增殖，使凋亡同时加快而达到新的平衡。但与骨质 破坏程度可能无直接关系。 【关键词】CDK 4P16胆脂瘤中耳免疫组化 [ABSTRACT ] Objective：T oobservethee xpressionofcyclin depend entkinase 4 (CDK4)andcycl in dependent kinaseinhibi torP16inhuma nmiddleearch olesteatomaa ndtoexploret hEirrolesinthedevelopmen tofcholestea toma. s : Thirty five cholesteatom astissuesand twentynormal humanexterna learcanalski nwereusedint hisstudy. All specimenswer estainedbyan immunohistoc hemicalSABCm ethodtodetecttheexpressi onofCDK4andP 16. Correlati onsbetweenth eaboveind sandbetweent heaboveindex esandthedegr eeofossicula rdestruction wereinvestig ated. Result： CDK4andP16we reexpressedi nparabasalla yersandtheup perlayer,mai nlyinthepric kleandgranul arlayersofch olesteatomae pithelium. Th eirpositiver ateswere%and %,respective ly. Statistic alanalysissh owedthatther ewasasignifi cantdifferen ceinpositive ratesbetween thenormalext ernalearcana lepitheliumandthecholest eatomaepithe lium,andapos itivecorrela tionbetweenC DK4andP16int hecholesteat omagroup (P ).Conclusion :CDK4andP16a reover expre ssedinhumanm iddleearchol esteatomaepi theliumandpo sitivelycorr elatewitheac hother,sugge stingthatthe yplayacooper ativeroleinthedevelopmen tofcholestea toma. Thechol esteatomaepi theliumhasah yper prolife rationabilit yandamechani smofinhibit! ngtheprolife ration. Theresultofimmuno histochemica 1examination isnotrelated tothedegreeo fossicularde struction. ［KEYWORDS ］ CD K4；P16；Chole steatoma,mid dleear； Immun ohistochemis try 有研究表明，胆脂瘤具有过度增殖性，但它同时还存在 着凋亡的增强［1］。许多细胞因子、癌基因产物、激素可影 响细胞周期运行，诱导或抑制细胞增殖或凋亡，在中耳胆脂 瘤发病中起作用［2 5］opl6表达产物P16蛋白与cyclinD 竞争性特异性结合细胞周期蛋白依赖性激酶CDK4和/或CDK 6而抑制其活性，对细胞增殖周期起负性调节作用，即通过 影响细胞周期运行速率参与调节细胞凋亡。近年来已证实 CDK4与pl6基因在多种肿瘤的发生发展中起重要作用，但在 良性病变中的研究则较少。本研究检测CDK4与P16在中耳胆 脂瘤上皮细胞中的表达状态，可从细胞周期调节角度为探讨 胆脂瘤的发病机制、预防与治疗提供实验参考。 1资料与方法 研究对象 实验组标本取自199 9年1月至XX年2月 在我科行手术治疗并经病理确诊的慢性胆脂瘤型中耳乳突 炎35例，其中男21例，女14例，1056岁，平均27岁；后 天性33例，先天性2例。并根据手术所见参照saleh等对 听小骨破坏程度分级的建议分成4级［6］：未受损8例；砧 骨被腐蚀、听骨链中断者5例；砧骨、镣骨弓同时破坏者14 例；锤骨柄与砧骨缺如、镣骨弓破坏者8例。挑选其中HE 染色的病理切片符合条件的石蜡包埋标本。入选条件是镜下 具有胆脂瘤3个基本特征：基质，即上皮组织；基质旁组织， 即上皮下结缔组织；囊内容物，为角化上皮等破碎细胞成分 和胆固醇结晶等物质。对照组为正常外耳道皮肤石蜡包埋标 本20例，取自最近行鼓膜修补术或乳突根治术的患者。 试剂 兔抗人多克隆抗体CDK4；兔抗人多克隆抗体 P16；广谱即用型SABC试剂盒；DAB显色试剂盒。均为武汉 博士德生物工程有限公司产品。 方法 所有标本均经10%福尔马林固定、石蜡包埋， 作3?um厚连续切片，贴于涂有％多聚赖氨酸的载玻片备用。 常规HE染色。链霉亲和素-过氧化物酶法免疫组化染色按 SAB C试剂盒说明书进行,用购自该公司的已知阳性片作阳性 对照，用PBS取代一抗作空白阴性对照。主要步骤：切片脱 蜡、水化，PBS 缓冲液洗 3 次X3?min ； 3%H2O22O?°C1 0