饲料中土霉素、氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考、磺胺类药物的测定

饲料中土霉素的测定-征求.pdf 饲料中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考的测定 高效液相色谱-串联质谱法.pdf 饲料中磺胺类药物的测定 液相色谱-串联质谱法.pdf 国家市场监督管理总局国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会国家标准化管理委员会 ICS 65.120 CCS B 46 饲料中土霉素的测定 Determination of oxytetracycline in feeds （征求意见稿） 202×-××-××发布202×-××-××实施 中中华华人人民民共共和和国国国国家家标标准准 GB/T 22259-202× 代替GB/T 22259－2008 发布发布 GB/T 22259－202× I 前言 本文件按照 GB/T 1.1－2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替 GB/T 22259－2008《 饲料中土霉素的测定 高效液相色谱法》，与 GB/T 22259－2008 相比，除结构调整和编辑性改动外，主要技术变化如下： a）文件名称由《 饲料中土霉素的测定 高效液相色谱法》更改为《饲料中土霉素的测定》； b）适用范围更改为“配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料、水产饲料、精料补充料和混合型饲 料添加剂”，更改了检出限和定量限（见第1章，2008年版的第1章）； c）更改了高效液相色谱法的原理（见4.1，2008年版的3）； d）更改了高效液相色谱法的试剂或材料（见4.2，2008年版的4）； e）更改了高效液相色谱法的仪器设备（见4.3，2008年版的5）； f）更改了高效液相色谱法的试验步骤（见4.5，2008年版的7）； g）更改了高效液相色谱法的计算公式（见4.6，2008年版的8）； h）增加了液相色谱-串联质谱测定方法（见第5章）。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC 76）提出并归口。 本文件起草单位：河南省农畜水产品检验技术研究院、陕西省畜牧技术推广总站。 本文件主要起草人： 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为： ——2008 年首次发布为 GB/T 22259－2008； ——本次为第一次修订。 GB/T 22259－202× 2 饲料中土霉素的测定 1范围 本文件描述了饲料中土霉素的高效液相色谱和液相色谱-串联质谱测定方法。 本文件适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料、水产饲料、精料补充料和混合型饲料添加 剂中土霉素的测定。 本文件高效液相色谱法配合料、浓缩料和精补料的检出限为1 mg/kg、定量限为2 mg/kg，添加剂预 混合饲料和混合型饲料添加剂的检出限为2 mg/kg、定量限为5 mg/kg，水产饲料的检出限为5.0 mg/kg， 定量限为10.0 mg/kg；液相色谱-串联质谱法的检出限均为0.02 mg/kg、定量限均为0.05 mg/kg。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 20195动物饲料试样的制备 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4高效液相色谱法（HPLC） 4.1原理 配合饲料、 浓缩饲料及精料补充料用盐酸甲醇溶液提取样品中的土霉素并用水稀释， 添加剂预混合 饲料和混合型饲料添加剂用Mcllvaine-Na2EDTA缓冲液提取样品中的土霉素，高效液相色谱仪检测，外 标法定量。 4.2试剂或材料 除非另有规定，仅使用分析纯试剂。 4.2.1水：GB/T 6682，一级。 4.2.2甲醇：色谱纯。 4.2.3盐酸甲醇溶液：移取 10 mL 盐酸于 1000 mL 甲醇中混匀。 4.2.450%甲醇溶液：移取 50 mL 甲醇，加水至 100 mL，混匀。 GB/T 22259－202× 3 4.2.5盐酸溶液（1 mol/L）：移取盐酸 9 mL，加水稀释至 100 mL，混匀。 4.2.6氢氧化钠溶液（10 mol/L）：称取氢氧化钠 40 g，加水溶解并稀释至 100 mL，混匀。 4.2.7Mcllvaine-Na2EDTA 缓冲液：分别称取一水柠檬酸 12.9 g，十二水磷酸氢二钠 27.6 g，二水乙二 胺四乙酸二钠 37.2 g，加水 900 mL 溶解，用盐酸溶液（4.2.5）或氢氧化钠溶液（4.2.6）调 pH 至 4.0± 0.5，加水稀释至 1000 mL，混匀，即得。 4.2.8EDTA-CaCl2-乙酸盐缓冲液：取乙二胺四乙酸二钠（C10H14N2O8Na2·2H2O）9.3 g，加水 500 mL， 溶解， 加氢氧化钠 4.0 g， 溶解， 冷至室温， 再依次加无水氯化钙 5.5 g， 乙酸 5.7 mL， 混匀， 加水至 1 000 mL，用氢氧化钠溶液（4.2.6）调 pH 至 6.6 ±0.1。 4.2.9标准储备液（1 mg/mL）：准确称取土霉素对照品（CAS：79-57-2，纯度不低于 88%）适量，相 当于土霉素 10 mg，于 10 mL 容量瓶中，加甲醇（4.2.2）溶解并定容，混匀。-20℃以下保存，有效期 为 1 个月。 4.2.10标准中间工作液（100 µg/mL）：准确移取标准储备液（4.2.9）1 mL，置 10 mL 容量瓶中，加 甲醇稀释并定容，配制成浓度为 100 µg/mL 的土霉素标准中间液。-20℃以下保存，有效期为 1 周。 4.2.11标准系列溶液：准确移取土霉素标准中间工作液（4.2.10）适量，配合饲料、浓缩饲料及精料补 充料用50%甲醇溶液（4.2.4），添加剂预混合饲料和混合型饲料添加剂用Mcllvaine-Na2EDTA缓冲液缓 冲液 （4.2.7） 稀释， 制得浓度为0.1µg/mL、 0.2µg/mL、 0.5 µg/mL、 1 µg/mL、 2µg/mL、 5 µg/mL和10 µg/mL 的标准系列溶液 4.2.12尼龙微孔滤膜：0.45 µm。 4.3仪器设备 4.3.1高效液相色谱仪：配荧光检测器。 4.3.2天平：感量 0.01g 和 0.01 mg。 4.3.4离心机：转速≥10 000 r/min。 4.3.5涡旋混合器。 4.3.6旋涡振荡器。 4.3.7超声波清洗器。 4.3.8酸度计。 4.4样品 按GB/T 20195制备样品，至少200 g，粉碎使其全部通过0.425 mm孔径的试验筛，充分混匀，装入 密闭容器中，备用。 4.5试验步骤 4.5.1提取 4.5.1.1配合饲料、浓缩饲料及精料补充料 平行做两份试验。 称取试样 5 g， 精确至 0.01 g， 置于 50 mL 离心管中， 准确加入盐酸甲醇溶液 （4.2.3） 25 mL，涡旋混合后振荡 10 min，10 000 r/min 离心 5 min，移取上清液 0.5 mL，加入 0.5 mL 水（4.2.1） ， 涡旋混匀，10 000 r/min 离心 5