MMP2-TIMP2系统与原发性开角型青光眼的相关性分析
MM5 2/TI洛2系统与原发性开角型青光眼的相关性分析 【摘要】目的探讨基质金属蛋白酶 2/金属蛋白酶组 织抑制因子 2(僦 2/TIM) 2)系统在原发性开角型青光眼中的 可能发病机制。方法正常人尸眼20只,中期原发性开角型青光眼患 者20只眼,晚期原发性开角型青光眼22只眼,均行常规小梁切除术, 采用RT PCR法检测小梁网组织中 僦 2 nRhA和TIIVP 2 nRhA 的表达。结果正常人和中、晚期原发性开角型青光眼小梁网均有僦 2 nRIW和TIM> 2 nRIW的表达;僦 2 nRhA在正常人小梁网 呈高表达,在原发性开角型青光眼中表达明显下调,且随病程发展其 表达逐步降低;TI 2 nRhA在正常人小梁网呈低表达,在原发性 开角型青光眼中表达明显上调,且随病程发展其表达逐步升高;原发 性开角型青光眼小梁网 僦 2 nRNVTIM> 2 nRhA比值明显低于 正常人,且随病程发展比值逐步减小。结论小梁网细胞外基质TIM> 对僦的异常抑制,造成僦 2/TI2系统的失衡,可能是原 发性开角型青光眼的发病机制之一。 【关键词】原发性开角型青光眼;小梁网;细胞外基质;基质金 属蛋白酶 2;基质金属蛋白酶抑制因子 2 原发性开角型青光眼(pri nary openangl e gl aucona, PCAQ是 常见的致盲性眼病之一,迄今为止,其病因及发病机制尚不清楚。目 前,认为小梁网房水排出阻力增加致眼压升高是造成PCAG视神经损 害的主要原因。小梁网内皮细胞上的沉积物称为细胞外基质 (extracel I ul ar naixt r i x, ECM ,由小梁细胞产生,对维持房水正常 流出十分重要。基质金属蛋白酶/金属蛋白酶组织抑制物(l\“s/TIM>s) 体系维持正常是ECM产生和降解保持动态平衡的重要调控机制。当 MvPs/TIM>s比例发生改变时,会影响ECM的降解[12]。僦 2 可降解I、H、m、IV、VI型胶原。有研究证实,小梁网ECM中有 MdP 2的表达,因此可能同时存在TI2对僦 2的调控。 为证实我们的推测,本研究通过RTPCR的方法检测人原发性开角 型青光眼小梁网中僦2 nRWTIM> 2 nRhA的表达,探讨MvP 2 nRNVTI2与原发性开角型青光眼的相关性。 1材料与方法 1. 1标本来源 早期原发性开角型青光眼的治疗原则以药物治疗为主,故未纳 入研究范围。选择2004年〜2006年在湘雅医院青光眼专科确诊的经 药物治疗眼压控制不良的中、晚期原发性开角型青光眼、并行常规小 梁切除术的患者共42人42只眼。其中中期原发性开角型青光眼患者 20人20只眼,男12例,女8例,年龄(42. 53± 14. 63)岁;晚期原 发性开角型青光眼患者22人22只眼,男13例,女9例,年龄(45.16 ± 18. 25)岁。中、晚期原发性开角型青光眼的纳入标准采用中华眼科 学会青光眼学组制定的标准[3]。采用健康意外死亡、并在生前同意 并签署《眼球器官捐献自愿书》者10人20只眼,男14例,女6例, 年龄(39. 26± 13.42)岁,自愿者均在签署同意书后行眼科系统检查, 结果正常者纳入研究。所有研究对象经裂隙灯显微镜及眼底镜检查, 未见屈光间质混浊及青光眼以外的其他眼病;色觉正常;瞳孔自然大 小;无高、低血压,糖尿病等全身性疾病。 1.2主要仪器及试剂 RT PCR逆转录试剂盒、dNTPs、Taq聚合酶等购自美国 Fern® nt as公司;barker、漠乙锭、载样缓冲液等为北京鼎国生物技 术发展中心产品。480型PCR热循环仪(美国Perki n El n®r公司); 州 HI稳压稳流微型凝胶电泳仪(北京六一仪器厂);PCR凝胶成像 系统(Eagl e Eye II图像处理系统)。 1.3方法 1. 3. 1标本采集 纳入研究范围的中、晚期原发性开角型青光眼患者、正常人尸 体新鲜离体眼球均在眼科显微镜下行常规小梁切除术,切取小梁组织 1rw 2mn大小,快速标记并放入液氮中冷冻保存,后移入-70。(:深低 温冰箱中保存,备用。 1. 3. 2小梁组织nRhA的RTPCR半定量检测 僦 2及TIM> 2引物序列参照文献[4],由华大基因上海 鼎安生物科技有限公司合成。采用大连宝生总RN^提取试剂盒提取各 组小梁组织细胞总RN^各组总RN^ 2p g ,按RT PCR试剂盒说明 书,逆转录为cN后进行PCK PCR反应条件:94。(:预变性5niin ,92°C 变性90s , 58°C退火1niin, 72°C 1niin ,共30个循环,最后72°C延 伸lOniii%取6p L PCR产物以15g/L的琼脂糖凝胶电泳,以0PDH 为内参照,进行吸光度定量分析,数值以僦 2、TIM> 2与0PDH 的吸光度比值表示nRhA表达的相对含量。凝胶电泳,漠化乙锭(EB) 染色后,凝胶成像系统半定量分析 N含量。 1.4统计学处理 所有统计均使用Ottati stica统计软件。MvP 2 nRN\ TIM> 2 nRISA表达的比较采用方差分析;三组僦 2nRWTIM> 2 nRIW 表达比值的比较采用秩和检验;相关性分析采用Spear nan相关性分 析法。以P0.05为差异有统计学意义。 2结果 2.1三组僦 2 nRN\ TIM> 2 nRhA表达的比较 MvP 2 nRhA在正常组表达较高,在中、晚期青光眼组表达 明显下调,差异显著(P8lt;0. 01) ;TIM> 2 nRhA在正常组表达较 低,在中、晚期青光眼组表达明显上调,差异显著(P 0. 01);僦 2 亦 与青光眼病程的发展呈负相关性(r=-0. 89 , P 0. 05), TIM> 2 nRN^表达与青光眼病程的发展呈正相关性(r=0. 93 , P81t;0. 05,表 1)。表 1 三组僦 2nRN\ TIM> 2 nRhA 表达的 比较(略) 2.2三组MvP 2 nRNVTI M> 2 nRIW比值的比较 正常组该比值较高(2. 011± 0. 251),中、晚期青光眼组比值明 显降低(0. 539± 0.043 , 0. 277± 0. 039),差异有统计学意义 (P8Jt;0. 01),并随青光眼病程的发展,该比值有逐渐降低的趋势 (r=- 0. 95 , P0. 05)。 3讨论 在各型青光眼中,原发性开角型青光眼的患病率在我国居第2位。 其病因主要是前房角小梁网病变,致房水通过该处流出眼外的阻力增 大,眼压升高。小梁网ECM的异常堆积是房水流出阻力增加的最重要 的因素。ECM主要由胶原、蛋白多糖、糖蛋白、糖胺多糖和弹力纤维 等物质组成,除作为间充组织填充细胞间隙外,尚通过细胞膜受体等 在细胞间信号转导过程中起重要作用。ECM产生与降解是一个非常复 杂、严格调控的生物学过程,有赖于调节其合成与代谢的酶之间的动 态平衡,其中以僦s/TIM)s系统调节最重要。国内尚未见到关于 MvP/TIIVP在原发性开角型青光眼小梁网中的表达及调控机制的研究 报道。 僦s是