MMP2-TIMP2系统与原发性开角型青光眼的相关性分析

MM5 2/TI洛2系统与原发性开角型青光眼的相关性分析 【摘要】目的探讨基质金属蛋白酶 2/金属蛋白酶组 织抑制因子 2（僦 2/TIM） 2）系统在原发性开角型青光眼中的 可能发病机制。方法正常人尸眼20只，中期原发性开角型青光眼患 者20只眼，晚期原发性开角型青光眼22只眼，均行常规小梁切除术， 采用RT PCR法检测小梁网组织中 僦 2 nRhA和TIIVP 2 nRhA 的表达。结果正常人和中、晚期原发性开角型青光眼小梁网均有僦 2 nRIW和TIM 2 nRIW的表达；僦 2 nRhA在正常人小梁网 呈高表达，在原发性开角型青光眼中表达明显下调，且随病程发展其 表达逐步降低；TI 2 nRhA在正常人小梁网呈低表达，在原发性 开角型青光眼中表达明显上调，且随病程发展其表达逐步升高；原发 性开角型青光眼小梁网 僦 2 nRNVTIM 2 nRhA比值明显低于 正常人，且随病程发展比值逐步减小。结论小梁网细胞外基质TIM 对僦的异常抑制，造成僦 2/TI2系统的失衡，可能是原 发性开角型青光眼的发病机制之一。 【关键词】原发性开角型青光眼；小梁网；细胞外基质；基质金 属蛋白酶 2;基质金属蛋白酶抑制因子 2 原发性开角型青光眼（pri nary openangl e gl aucona, PCAQ是 常见的致盲性眼病之一，迄今为止，其病因及发病机制尚不清楚。目 前，认为小梁网房水排出阻力增加致眼压升高是造成PCAG视神经损 害的主要原因。小梁网内皮细胞上的沉积物称为细胞外基质 extracel I ul ar naixt r i x, ECM ,由小梁细胞产生，对维持房水正常 流出十分重要。基质金属蛋白酶/金属蛋白酶组织抑制物l\s/TIMs 体系维持正常是ECM产生和降解保持动态平衡的重要调控机制。当 MvPs/TIMs比例发生改变时，会影响ECM的降解［12］。僦 2 可降解I、H、m、IV、VI型胶原。有研究证实，小梁网ECM中有 MdP 2的表达，因此可能同时存在TI2对僦 2的调控。 为证实我们的推测，本研究通过RTPCR的方法检测人原发性开角 型青光眼小梁网中僦2 nRWTIM 2 nRhA的表达，探讨MvP 2 nRNVTI2与原发性开角型青光眼的相关性。 1材料与方法 1. 1标本来源 早期原发性开角型青光眼的治疗原则以药物治疗为主，故未纳 入研究范围。选择2004年〜2006年在湘雅医院青光眼专科确诊的经 药物治疗眼压控制不良的中、晚期原发性开角型青光眼、并行常规小 梁切除术的患者共42人42只眼。其中中期原发性开角型青光眼患者 20人20只眼,男12例,女8例，年龄42. 53 14. 63岁;晚期原 发性开角型青光眼患者22人22只眼，男13例，女9例，年龄45.16 18. 25）岁。中、晚期原发性开角型青光眼的纳入标准采用中华眼科 学会青光眼学组制定的标准［3］。采用健康意外死亡、并在生前同意 并签署眼球器官捐献自愿书者10人20只眼，男14例，女6例， 年龄（39. 26 13.42）岁，自愿者均在签署同意书后行眼科系统检查， 结果正常者纳入研究。所有研究对象经裂隙灯显微镜及眼底镜检查， 未见屈光间质混浊及青光眼以外的其他眼病；色觉正常；瞳孔自然大 小；无高、低血压，糖尿病等全身性疾病。 1.2主要仪器及试剂 RT PCR逆转录试剂盒、dNTPs、Taq聚合酶等购自美国 Fern nt as公司；barker、漠乙锭、载样缓冲液等为北京鼎国生物技 术发展中心产品。480型PCR热循环仪（美国Perki n El nr公司）; 州 HI稳压稳流微型凝胶电泳仪（北京六一仪器厂）;PCR凝胶成像 系统（Eagl e Eye II图像处理系统）。 1.3方法 1. 3. 1标本采集 纳入研究范围的中、晚期原发性开角型青光眼患者、正常人尸 体新鲜离体眼球均在眼科显微镜下行常规小梁切除术，切取小梁组织 1rw 2mn大小，快速标记并放入液氮中冷冻保存，后移入-70。深低 温冰箱中保存，备用。 1. 3. 2小梁组织nRhA的RTPCR半定量检测 僦 2及TIM 2引物序列参照文献[4],由华大基因上海 鼎安生物科技有限公司合成。采用大连宝生总RN提取试剂盒提取各 组小梁组织细胞总RN各组总RN 2p g ,按RT PCR试剂盒说明 书,逆转录为cN后进行PCK PCR反应条件94。预变性5niin ,92C 变性90s , 58C退火1niin, 72C 1niin ,共30个循环，最后72C延 伸lOniii取6p L PCR产物以15g/L的琼脂糖凝胶电泳，以0PDH 为内参照，进行吸光度定量分析，数值以僦 2、TIM 2与0PDH 的吸光度比值表示nRhA表达的相对含量。凝胶电泳，漠化乙锭EB 染色后，凝胶成像系统半定量分析 N含量。 1.4统计学处理 所有统计均使用Ottati stica统计软件。MvP 2 nRN\ TIM 2 nRISA表达的比较采用方差分析;三组僦 2nRWTIM 2 nRIW 表达比值的比较采用秩和检验；相关性分析采用Spear nan相关性分 析法。以Pt;0.05为差异有统计学意义。 2结果 2.1三组僦 2 nRN\ TIM 2 nRhA表达的比较 MvP 2 nRhA在正常组表达较高，在中、晚期青光眼组表达 明显下调，差异显著P8lt;0. 01 ;TIM 2 nRhA在正常组表达较 低，在中、晚期青光眼组表达明显上调，差异显著P t; 0. 01;僦 2 亦 与青光眼病程的发展呈负相关性r-0. 89 , P t; 0. 05, TIM 2 nRN表达与青光眼病程的发展呈正相关性r0. 93 , P81t;0. 05，表 1。表 1 三组僦 2nRN\ TIM 2 nRhA 表达的 比较略 2.2三组MvP 2 nRNVTI M 2 nRIW比值的比较 正常组该比值较高2. 011 0. 251，中、晚期青光眼组比值明 显降低0. 539 0.043 , 0. 277 0. 039,差异有统计学意义 P8Jt;0. 01,并随青光眼病程的发展，该比值有逐渐降低的趋势 r- 0. 95 , Pt;0. 05。 3讨论 在各型青光眼中,原发性开角型青光眼的患病率在我国居第2位。 其病因主要是前房角小梁网病变，致房水通过该处流出眼外的阻力增 大，眼压升高。小梁网ECM的异常堆积是房水流出阻力增加的最重要 的因素。ECM主要由胶原、蛋白多糖、糖蛋白、糖胺多糖和弹力纤维 等物质组成，除作为间充组织填充细胞间隙外，尚通过细胞膜受体等 在细胞间信号转导过程中起重要作用。ECM产生与降解是一个非常复 杂、严格调控的生物学过程，有赖于调节其合成与代谢的酶之间的动 态平衡，其中以僦s/TIMs系统调节最重要。国内尚未见到关于 MvP/TIIVP在原发性开角型青光眼小梁网中的表达及调控机制的研究 报道。 僦s是