细胞遗传室工作手册SOP

第一章第一章 设备与器械设备与器械 中南大学湘中南大学湘 雅医院医学雅医院医学 遗传学国家遗传学国家 重点实验室重点实验室 1 1 目的目的 规范实验室用房， 确保实验室工作和业务用房的正常需要，以促进科室的发 展，确保各项工作顺利进行。 2 2 实验室用房规范与要求实验室用房规范与要求 细胞遗传学实验室一般分为洗涤室、 培养室、 细胞学处理室、 阅片室、 暗室、 档案室。其要求一般与其他普通实验室的要求基本相同: 1. 便于所有器具的清洗。 2. \ 3. 文件编号 版本/修订号 发布日期 实施日期{ ~作业指导书 实验室用房使用规范 便于准备消毒及各种试剂的保藏。 4. 便于使用各种方法检测待检标本，进行细胞遗传学方面的临床诊断。 但同时需要具有暗室并具有符合医疗档案存放的档案室。 洗涤室洗涤室 玻璃器皿的清洗、包装，培养物质的准备与消毒，供应物品的保藏等工作都 需在洗涤室里进行，洗涤室的大小一般为 4m×6m，洗涤室应设有下列设备： 1.一个清洗玻璃器皿的水槽，便于清洗、晾干； 2.电热干燥消毒箱，用于玻璃器皿的干热灭菌； 3.高压蒸汽灭菌锅，用于不能耐受干热灭菌物品的处理； 、 4.烤箱两个便于烤干玻璃器皿或高压蒸汽灭菌物品； 5.石英玻璃双重蒸馏器或超纯水装置，用于蒸馏水或超纯水的制备； 6.真空泵一个，以备配制培养基过滤时用； 7.物品准备台，以备包裹玻璃器皿等； 8.储柜或储架，便于清洗干燥的器皿或其它物品存放； 9.酸缸，一般最好是耐酸材料，用于盛装清洗液，清洗液多为含重铬酸钾的 硫酸溶液。 培养室培养室 培养室包括操作间和缓冲室，操作室功能是进行无菌操作和细胞培养，如各种组织取 材与接种材料的准备、培养物的生长状态观察等，因此应配有超净工作台、CO2培养箱、倒 置显微镜、小型低速离心机、冰箱、 玻璃柜等。缓冲室则是供工作人员进入培养室前换消毒 衣服、鞋、帽等之用。培养室一般3m×3m 已够用，要求清洁、干燥、不通风、光线适宜。 操作间必须墙壁光滑并装有空调器， 操作间与外间实验室之间最好有传递窗， 以便传递临时 需用的实验用品。培养室空气消毒可采取紫外线消毒或空气净化。 细胞学处理室细胞学处理室 细胞学处理室需要配备普通离心机、 恒温水浴箱及恒温电烤箱 （烤片用） 等， 主要用于染色体的收获与显带。 暗室暗室 暗室用于对荧光原位杂交技术结果的观察和分析， 配备荧光显微镜和分析系 统。 … … 中南大学湘中南大学湘 雅医院医学雅医院医学 遗传学国家遗传学国家 重点实验室重点实验室 作业指导书 各类仪器设备标准操作规程 文件编号 版本/修订号 ` 发布日期 “ 实施日期 1 1 目的目的 — 规范各类仪器的正常使用和保养， 延长仪器的使用寿命，确保各结果的准确 性。 2 2 仪器使用环境：仪器使用环境： 1）无灰尘、通风环境良好。 2）避免阳光直射。 3）室内温度 18～30℃，变化不超过±2℃ 4）室内湿度 2～80%RH。 5）电源电压变化再 20V±10V 之内，5m 内不能有配电器。 3 3 使用仪器程序使用仪器程序 ￥￥ 超净工作台超净工作台 超净工作台是目前实验室内普遍应用的无菌操作装置， 在超净工作台内进行 无菌操作， 可明显地减少细菌污染的机会。超净工作台的工作原理是利用鼓风机 驱动空气，通过高效空气微粒滤层净化，使操作范围形成无菌环境。 培养箱培养箱 实验室一般应置备二台 CO 2 培养箱， 将来自同一标本的培养瓶分两线放入不 同的培养箱内培养，以保证细胞培养的成功率。 CO 2 培养箱常见的是隔水式培养 箱。 培养的细胞需要一个恒定的温度， 过低或过高的环境温度均可导致细胞死亡， 因此对培养箱的灵敏度要求在±℃。此外，一定浓度的 CO 2 也是细胞培养所必需 的。CO 2 培养箱可恒定地提供细胞所需的 CO 2（通常是 5%）,使培养液的 pH 值保 持稳定，适用于开放性培养。使用时应注意每三个月定期校正，如有异常应及时 调整。培养箱内空气必须保持清洁，应定期用酒精擦拭消毒，消毒时每层隔板均 需洗刷干净，并用 75％酒精纱布擦拭。每周定期更换箱底水盘中的水，以保持 相对湿度。 为防污染可在水盘内加入 1‰新洁尔灭。 箱内高效空气过滤器堵塞时， 指示灯提示后需及时更换 烤箱烤箱 烤箱用于玻璃器皿的烘干和干热灭菌，一般以 650mm×500mm×500mm 的比较 适用。 烤箱都装有鼓风装置， 鼓风与升温同时开始。 干热灭菌物品时一般为 180℃ 维持，灭菌后应待箱内温度下降至 80℃时方可开门，以免骤冷而致玻璃器皿损 坏。应注意的是橡皮制品、塑料培养板、有机玻璃制品禁用烤箱灭菌。 恒温水浴锅恒温水浴锅 恒温水浴锅是实验室不可缺少的设备。主要用于显带处理和培养基的加温。 由专人负责每周更换蒸馏水并添加防腐剂。 【【 水纯化装置水纯化装置 离体培养的细胞对水的要求特别高， 培养细胞用的器皿清洗最后一道程序应 用二蒸水冲洗， 培养基的配制也应用二蒸水或超纯水。目前常用的有自动双重纯 水蒸馏器（石英管加热） ，因为普通的橡皮对细胞是有毒的，所以制备好的二蒸 水应避免通过橡皮管放出。 冰箱冰箱 实验室必须配备有普通冰箱和低温冰箱（-20℃） ，普通冰箱用于培养液、生 理盐水、Hanks 溶液等试剂和标本短期的存放，低温冰箱用于贮存需要冷冻保持 生物活性及长时间存放的试剂如血清等。 细胞冷冻贮存器细胞冷冻贮存器 细胞冷冻装置一般分为运输用和储存用二种液氮罐， 用于细胞株和标本的保 存，液氮罐双层结构中间为真空层，其内胆颈部与体部经焊接相连，故搬动和装 入液氮时，应缓慢加入，使容器内的温度均匀下降，有条件可配备有程控降温仪 的液氮储存系统，该系统的特点是可自动控制冷冻箱的降温速度。 离心机离心机 细胞培养需要经常消化分离细胞、 漂洗制备细胞悬液和进行传代以及染色体 的收获， 因此接种培养室与细胞处理室内可各配置一台可调速的小型台式离心机。 \ \ 高压蒸汽灭菌装置高压蒸汽灭菌装置 高压灭菌是利用高压蒸汽使细菌体内蛋白凝固而达到灭菌， 是最常用的灭菌 方法。在℃，30 分钟就能杀死所有繁殖型细菌的芽胞。高压蒸汽灭菌比其它灭 菌方法效果都好。 由于蛋白质的凝固需有水分存在， 当细菌体内含有水分在 25％ 以下时，蛋白质的凝固温度如下： 水分含量凝固温度 25％ 74-80℃ 8％ 80-90℃ 6％ 145℃ 由此可见，在细菌体内有水分存在的条件下可以大大降低灭菌所需的温度。 高压灭菌主要用于细胞培养所需的二蒸水、生理盐水、手术器械、布类、橡 皮类等。 % % 4 4 显微镜与细胞遗传图象分析工作站显微镜与细胞遗传图象分析工作站 显微镜是分析染色体的必备工具，一般要求每位实验室技术人员配备一台。 有条件的实验室可配备细胞遗传图象分析工作站。 维护保养记录维护保养记录 每日保养每日保养 每日登记各仪器的运行和使用情况，保证每台仪器的正常运行。 每周保养每周保养 每周对各仪器进行清洁维护，检查各仪器是否存在各类使用的隐患。 每月保养每月保养 ; 冲洗冲洗 浸酸后的器皿必须用自来水冲洗干净， 冲 8-10 次后再用一蒸水冲二次， 二蒸水冲一次