微生物限度检查方法适用性验证方案

微生物限度检查方法适用性试验方案之答禄夫天创作微生物限度检查方法适用性试验方案之答禄夫天创作 创作时间：二零二一年六月三十日 验证方案组织与实施验证方案组织与实施 微生物限度检查方法适用性试验工作应由质量管理部份负责 组织, 质量管理部份有关人员组成验证小组, 介入实施. 方案起草 部份/职务 质量管理部 QC 签名日期 方案审核 部份/职务 质量管理部 QC 经理 签名日期 方案批准 部份/职务 质量管理部质量总监 批准人批准日期 目录 一、 概述 二、 验证目的和风险评估 三、 验证内容 四、方法判定 五、再验证周期 六、参考文献 七、结果评价及结论 1、概述： 创作时间：二零二一年六月三十日 微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受 微生物污染水平的方法.检查项目包括需氧菌数、霉菌数和酵母菌 数及控制菌检查.当建立产物的微生物限度检查法时, 应进行需氧 菌、霉菌和酵母菌计数方法的适用性试验和控制菌检查方法的适 用性试验, 以确认所采纳的方法适合于该产物的需氧菌、霉菌和 酵母菌数的测定和控制菌检查. 依照中国药典 2015 版, 需氧菌、霉菌和酵母菌及控制菌均采 纳平皿法进行方法适用性试验. 2、试验目的和风险评估： 验证目的：确认所采纳的需氧菌、霉菌和酵母菌计数方法及控制 菌检查方法适合我公司所生产产物的微生物限度检查. 风险评估： 项目 未按方案执行 潜在失效模式 试验部份项目呈现偏差 和漂移 未到达试验标准 失效影响 直接影响试验结果的 正确性 试验失败 采用办法 严格执行经批准 的试验方案 未严格遵循试验方 案规定 试验过程把持不妥 3、验证内容： 3.1、培养基来源： 品名批号规格来源 创作时间：二零二一年六月三十日 创作时间：二零二一年六月三十日 确认人： 确认日期： 3.2、检查用培养基配制方法： 培养基名称 胰酪年夜豆胨琼脂培养基 胰酪年夜豆胨液体培养基 沙氏葡萄糖液体培养基 沙氏葡萄糖琼脂培养基 麦康凯琼脂培养基 麦康凯液体培养基 配制方法 取本品 g, 加水 1000ml, 加热溶解, 分装, 121℃, 15 分钟灭菌, 备用. 取本品 40g, 加水 1000ml, 加热溶解, 分装, 121℃, 15 分钟灭菌, 备用. 取本品 g, 加水 1000ml, 加热溶解, 分装, 121℃, 15 分钟灭菌, 备用. 取本品 g, 加水 1000ml, 加热溶解, 分装, 121℃, 15 分钟灭菌, 备用. 取本品 65.0g, 加水 1000ml, 加热溶解, 分装, 121℃, 15 分钟灭菌, 备用. 取本品 50.0g, 加水 1000ml, 加热溶解, 分装, 121℃, 15 分钟灭菌, 备用. 取本品, 加水 1000ml, 加热溶解, 分装, 121℃, 15 分钟灭菌, 备用. 确认人：确认日期： 3.3、使用仪器 名称 数显电热恒温培养 箱 数显霉菌培养箱 型号校验单元有效期至 确认人:确认日期： 3.4、验证试验用菌种： 菌种名称 金黄色葡萄球菌 年夜肠埃希菌 铜绿假单胞菌 枯草芽孢杆菌 白色念珠菌 代号传代代数来源 创作时间：二零二一年六月三十日 创作时间：二零二一年六月三十日 黑曲霉菌 确认人：确认日期： 3.5 试验方法： 取供试品 10 ml→1:10 供试液.需氧菌、霉菌和酵母菌、控 制菌采纳惯例法. 3.6 菌液的制备： 取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、年夜肠埃希菌、枯草芽孢杆 菌的胰酪年夜豆胨琼脂斜面培物一铂金饵 , 加入胰酪年夜豆胨液 体培养基中置 30～ 35℃培养箱中培养 18～24h, 取金黄色葡萄球 菌、铜绿假单胞菌、年夜肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的胰酪年夜豆 胨液体培养物 1ml 加入 9ml0.9％无菌氯化钠溶液中, 制成 10 的 菌液, 依法 10 倍稀释至 10 , 分取各菌悬液 1ml 注入平皿中, 立 即倾注胰酪年夜豆胨琼脂培养基 20ml, 各菌悬液平行制备两个平 皿, 平皿法培养计数, 取小于 100CFU/ml 和 1000CFU/ml 的菌液备 用. 取白色念珠菌的沙氏葡萄糖琼脂斜面培养物 , 加入沙氏葡萄糖液 体培养基中置 20～25℃培养箱中培养 24～48h, 取白色念珠菌的 沙氏葡萄糖液体培养物 1ml 加入 9ml0.9％无菌氯化钠溶液中, 制 成 10 的菌液, 依法 10 倍稀释至 10 -1～7, ～7 -1 取菌悬液 1ml 注入平皿中, 立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基 25ml, 各菌悬液平行制备两个平 皿, 平皿法培养计数, 取小于 100CFU/ml 和 1000CFU/ml 的菌液备 用. 创作时间：二零二一年六月三十日 创作时间：二零二一年六月三十日 取黑曲霉的新鲜培养物接种子沙氏葡萄糖琼脂斜面上, 20-25℃培 养 5-7 天, 加入 3-5ml 含 0.05%聚山梨酯 80 的 0.9%无菌氯化钠溶 液, 将胞子洗脱.取 1ml 加入含 0.05%聚山梨酯 80 的 9ml 0.9%无 菌氯化钠溶液中, 制成 10的菌液, 依法 10 倍稀释至 10 , 取, 取菌悬液 1ml 注入平皿中, 立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基 25ml, 各菌悬液 平行制 备两个平 皿 , 平皿法培养 计数 , 取小于 100CFU/ml 和 1000CFU/ml 的菌液备用. 3.7 需氧菌、霉菌和酵母菌计数方法适用性试验： 供试液制备： 取供试品 10 ml→1:10 供试液. 实验条件： 需氧菌培养温度：30～35℃3～5 天培 养箱： -1～7 霉 菌 和 酵 母 菌 培 养 温 度 ： 20 ～ 25 ℃5 ～ 7天 培养箱： 3.7.3 试验方法： 3.7.3.1 试验组： 3.7.3.1.1 分别取供试液 9.9ml, 分别铜绿假单胞菌、金黄色葡萄 球菌、枯草芽孢杆菌 , 混匀后取其中 1ml 注皿,倾注温度不超越 45℃的胰酪年夜豆胨琼脂培养基 20ml, 置 30～35℃或培养箱中培 养不超越 3 天, 计数, 每株试验菌平行制备 2 个平皿. 3.7.3.1.2 分别取供试液 9.9ml, 分别白色念珠菌、黑曲霉菌液, 创作时间：二零二一年六月三十日 创作时间：二零二一年六月三十日 混匀后分别取其中 1ml 注皿,倾注温度不超越 45℃的胰酪年夜豆 胨琼脂培养基 20ml, 置 30～35℃或培养箱中培养不超越 5 天, 计 数, 每株试验菌平行制备 2 个平皿.另分别取其中 1ml 注皿, 倾注 温度不超越 45℃的沙氏葡萄糖琼脂培养基 20ml, 置 20～25℃或 培养箱中培养不超越 5 天, 计数, 每株试验菌平行制备 2 个平皿. 3.7.3.2 菌液对比组：分别取稀释液 9.9ml, 分别菌液, 按试验组 把持,倾注温度不超越 45℃的胰酪年夜豆胨琼脂培养基和沙氏葡 萄糖琼脂培养基, 置与试验组相同条件下培养, 计数.每株试验菌 平行制备 2 个平皿. 供试品对比组：取供试液 1ml, 倾注温度不超越 45℃的胰酪年夜 豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基 , 置与试验组相同条件 下培养, 计数.每株试验菌平行制备 2 个平皿. 3.7.4 实