医学毕业论文经皮冠状动脉内支架植入术对外周血单核细胞nf

XX大学 毕业论文 经皮冠状动脉内支架植入术对外周血单核细胞NF 2014年6月25日 经皮冠状动脉内支架植入术对外周血单核细胞NF 作者：王晖，杨志健，黄峻，朱铁兵，王连生，曹克将 【关键词】，外周血单核细胞 Activation of NFkB induced by coronary stent placement in peripheral blood mononuclear cells [Abstract] AIM: To investigate the effect of coronary stenting on the activation of NFkB in peripheral blood mononuclear cells (PBMC). S: Fifty patients were classified into two groups: 28 patients in stenttreatment group and 22 in coronary angiography (CAG). The levels of NFkB activity preprocedural and during the days after stent placement were determined using electrophoresis mobility shift assay (EMSA). RESULTS: The levels of NFkB activity in stenttreatment group from preprocedural to the 4th hour, 1 st, 2nd and 3rd days after stent placement were (1.17±0.25) fold, (1.23±0.30) fold, (2.00±0.45) (2.49±0.46) fold and (2.25±0.4) fold respectively. Significantly increased levels of NFkB activity were seen in the 1st, 2nd and 3rd days (P0.05). No alteration of NFkB activity was seen in CAG group. CONCLUSION: Increased level of NFkB activation in PBMC may be involved in the stent injury of the targeted vessel wall. [Keywords 】 peripheral blood mononuclear cells; NFkappa B; stents 【摘要】目的：探讨经皮冠状动脉内支架植入术是否激活外周血单核细 胞(PBMCs)中核因子kB (NFkB)活性的表达.方法：选择NFkB基线时呈阴性反 应的稳定型心绞痛患者50例，其中单纯造影组22例，支架治疗组28例.分别 于冠脉造影或支架术后4 h及术后第1, 2, 3d留取全血抗凝标本；采用凝胶 电泳迁移率实验(EMSA)测定PBMCs中NFkB的活性.结果：支架术程中NFkB 活性呈动态变化，于术后1 d NFkB活性显著性升高呈阳性反应，术后2 dNFKB 活性达峰值，术后3 d NFkB活性有下降，但仍保持在高水平表达状态.而造影 组患者则没有NFkB活性变化.结论：冠状动脉内支架术激活外周血单核细胞 NFkB活性. 【关键词】 外周血单核细胞；NFkB；支架 0引言 经皮冠状动脉介入治疗(percutaneous coronary intervention, PCI)能迅速开 通罪犯血管,恢复心肌供血、挽救心肌、挽救生命;但对于不同病例仍有30%〜50% 的再狭窄率[1].病理研究发现支架内再狭窄发生率与PCI术后靶血管处异常 增多的炎症介质和炎细胞浸润相关[2],而细胞因子、趋化因子等炎症介质的 合成、分泌受核因子kB (NFkB)等转录因子调控[3].因而了解PCI术程中NFkB 的活性变化，可能对阐明PCI的炎症机制具重要意义.为此，我们探讨了冠状动 脉内支架术血管急性损伤期周围血单核细胞(PBMC)NFkB的活性变化. 1对象和方法 1.1对象 选择在我院冠心病诊治中心行冠状动脉造影术或支架术的稳定型心绞痛 患者50例.按是否行冠状动脉内支架植入术分为支架治疗组和单纯造影组.所 有患者于冠状动脉造影术前NFkB活性测定呈阴性.排除标准：①急性心肌 梗死、不稳定性心绞痛伴肌钙蛋白水平升高；②严重的心脏瓣膜疾病及风湿、 类风湿活动；③心肌炎，心肌病，明显的肝脏和肾脏疾病伴肝或肾功能不全； ④近期感染性疾病. 1.2方法 1.2.1冠状动脉造影和支架术采用Judkins法经右股动脉按常规方法进行. 术前24 h 口服氯毗格雷(波立维)300 mg.支架术前即刻静脉推注或股动脉套管 内注射肝素6000〜8000 U(按公斤体质量计算)；本研究中所有患者均经球囊预扩 张后植入支架.手术成功标准：残余狭窄＜30%, TIMI3级. 1.2.2血液标本收集分别于冠状动脉造影和支架术术前，术后即刻，4h, 1, 2, 3d留取全血抗凝标本，进行PBMC提取. 1.2.3PBMC NFkB 活性测定 1.2.3.1主要试剂［y32P］ ATP放射性摩尔活度：185 PBq/moh体积活度 370 GBq/L, 2 wk内完成实验(北京亚辉生物医学工程公司).凝胶电泳迁移率实 验试剂盒(Gel shift assay core system), NFkB consensus oligo 及 T4 多核昔酸激酶 (Promega公司提供). 1.2.3.2核蛋白提取及浓度测定参照Schreiber等［4］方法.简述如下：初 步提取的PBMCs经PBS洗涤后，加缓冲液A(buffer A),冰上静置20 min,加 入NP40裂解离心，取沉淀再加缓冲液C(buffer C)悬浮混匀，高速离心收集上清 液中的核蛋白并进行蛋白浓度测定. 1.2.3.3凝胶电泳迁移率实验(EMSA)① 在T4激酶作用下，37°C将［y32P］ ATP标记于NFkB寡核昔酸上；②加入核蛋白提取物(10 g/L)室温20°C下孵育 20 min；③40 g/L非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳约2 h；④-70°CX光片增感屏放 射自显影36 h. 1.2.3.4半定量分析凝胶图像扫描系统对显影照片进行光密度扫描，以 arbitrary units(AU)表示结果.入1)=实验组/空白对照组光密度.本实验以2AU判定 为阳性结果，否则为阴性结果. 1.2.4cTnI水平测定采用双夹心ELISA法.正常参考值：cTnl: 0~7 ptg/L. 统计处理：用SPSS 10.0软件包进行统计.计量资料以x±s表示.数据采 用重复测量的方差分析.P0.05认为差异有统计学意义. 2结果 2.1临床资料分析本研究人群共计50