医院检验微生物作业指导书
室内质量控制管理程序 XX医院检验微生物作业指导书 文件编号:XX-JY-XJ-XXX 版本: 生效日期: 共页第页 1. 目的 规范微生物实验室内部质量控制,确保临床报告的质量。 2. 适用范围 微生物实验室的所有检验项目。 3. 职责 实验室检验人员均需熟知并遵守本程序。 4. 程序 4.1分析前质量控制 4.1.1检验申请单:临床医生应按照《微生物检验项目申请程序》申请临床 微生物检测口头申请追加样本检验项目,必须在样本有效期内申请.并补正式的 检验申请单。 4.1.2生成微生物检验标本标签:护士应在核对医嘱患者信息和检验申请信 息后,按照《微生物检验标本条形码程序》生成申请单和微生物检验项目标签, 并将微生物检验项目标签正确张贴于标本容器上。 4.1.3样本采集手册:实验室应制订样本采集手册,指导正确采集和处理样 本。 4.1.4样本采集和运输:样本采集人员应按照《采样前患者识别程序》确认 患者,按照《标本采集、运送、保存程序》采集样本,并在规定的时间和温度范 围内,使用指定的运输培养基,安全运送到微生物室。 4.1.5样本的接收:样本接收人员应严格按照《标本接收、标识及信息录人 程序》《标本拒收程序》对样本接收或拒收,并记录。 4.1.6微生物检验标本信息输人:微生物实验室接种岗位检验人员严格按照 相关的微生物标本检验信息输,人程序录人,核对患者信息和标本信息等资料。 4.1.7样本储存:微生物实验室接种岗位检验人员按照相关的微生物标本检 验前储存程序正确铺存未能及时处理的标本,已经检验的样本应在保证其性质稳 定的条件下,将样本以适当的方式保留到规定时间内,以便能在出具结果报告后 可以复查,成做补无检食。 4.2分析中质量控制 4.2.1试剂的质量控制 4.2.1.1所有试剂用于检测标本前,必须做质控以验证试剂性能并记录质控结 果,只有质控合格才可使用(表2-1-1)。质控应遵循以下原则。 4.2.1.1.1使用中的染色剂(革兰染色、特殊染色和荧光染色),至少每周(若 检测频率小于每周1次,则实验当日)用已知阳性和阴性(适用时)的质控菌株 检测。 4.2.1.2平行试验:新批号试剂使用前须用老试利或参考材料平行试验。 4.2.1.3无厂商特别说明时,不同批号的试剂不可混用。 4.2.1.4缺陷或失效试剂只能用于培训员工业务能力,否则报废处理。培训试 剂应明显标记“仅供培训使用“,并与检验试剂分开放置。 4.2.2培养基的质量控制 4.2.2.1培养基外观良好(平滑、水分适宜、无污染、适当的颜色和厚度,试 管培养基湿度适宜),新批号及每一贷次的商品成自配培养基应检测相应的性能, 包括无菌试验、生长试验或与旧批号平行试验、生长抑制试验(适用时)、生化 反应(适用时)等,应以质控菌株进行验证。 4.2.2.2外观检查合格的培养基的标准:完整,琼脂附于平板底部,血平板应 不透明、没有溶血情况,平板颜色好、湿润,无干裂、无污染、无浑浊或沉淀、 无冻伤、无过热现象,琼脂厚度至少3mm。如发现与上述情况不符的培养基, 应不予使用。 4.223无菌试验时抽检培养基数量:100块以内,随机抽检5%;100块以上 可随机取10块平板或10支试管培养基进行无南试验。35C培养24h后观察是否 有细菌生长,无细菌生长为合格。 4.2.2.4 生长试验及生化反应试验:质控菌栋(表2-1-2.表2-1-3)于35C培养24h, 用无菌生理盐水配制0.5麦氏单位的细菌胁悬液。无菌生理盐水1: 100稀释, 每块平板接种lOpi (浓度相当于103~104CFU/平板),培养24~48ho符合生长、 生化试验质控标准者方可使用。失控者必须记头失控情况并有相应的到正措施。 表2-1-1常用试验试剂质量控制 试剂 阳性对照 阴性对照 监测频率 氧化酶 铜绿假单胞菌ATCC 27853 大肠埃希菌ATCC 25922 每次新配制时及使用中每个工作日 触酶 金黄色葡萄球菌ATCC 25923 A群链球菌ATCC 19615 每次新配制时及使用中每个工作日 靛基质 大肠埃希菌ATCC 25922 肺炎克雷伯菌AIOC 13883 1%蛋白豚水及院基质试剂:每次新 配制时及使用中每个月1次 4.2.1.2凝固酶、过氧化氢酶、氧化酶、P内酰胶酶,实验当日应做阴性和阳 性质控,商业头租南试剂的日内藏胶房试险可遵循制范南的建议。诊断性抗血清 试剂,实验当日室少应做多价血清阴性和阳性质控。定性试验试剂每次检测时应 至少包括阳性和阴性质控菌株。不含内质控的直接抗原检测试剂,实验当日应检 测阳性和阴性质控。 4.2.1.1.3 一般细菌药敏试验应以CLSIMOOO规定质控标准菌株连续检测 20-30日,每一组药物/细菌超出参考范围(抑菌圈直径或MIC)的频率应不超 过(W) 1/20或3/30;也可采用替代质控方案,即连续5日,每日对每一组药物 /细菌重复测定3次,每次单独制备接种物,15个数据超出参考范围(抑菌圈直 径或MIC)的结果应不超过(W) 1个,若失控结果为2~3个,则如前述,再进 行5日,每日3次重复试验,30个数据失控结果应不超过(W)3个。此后,应 每周使用标准菌株进行质控。若检测频率小于每周1次,则每个检测日应进行质 控。采用自动或半自动仪器检测MIC时,应按照制造商的要求进行质控。 4.2.1.1.4真菌药敏试验:酵母菌真菌药敏试验主要参考美国CLSIM27ED4. M44-A2,丝状真菌药敏试验主要参考美国CLSLM38A3、M51-A进行。质控菌 株重悬在含50%甘油肉汤中冻存于-70°C。使用时,质控菌株接种于沙保弱平板 上,存放于2~8C,每周传代,连续传代不超过3次。至少每个月将冻存的质控 菌株复苏1次备用。药敏试验前冻存的质控菌株应传代至少2次。质控频率:连 续30天检测所有质控菌株药敏并记录结果,当每种药物对每个菌株的药敏结果 不超过3次失控时,可以由日质控转为周质控。周质控时当单个MIC失控时, 要重新进行日质控并解决失控的问题,确保所有的MIC值均在控。在重新周质 控之前,需要连续进行30天日质控。质控菌株检测结果应符合CLSIM60、M61 文件要求。 4.2.1.1.5厌氧菌:应以有效的方法检测厌氧培养环境(如以亚甲蓝试条、厌 氧菌或其他适当方法)。 4.2.1.1.6分枝杆菌:抗酸染色应在实验当日用适当的阴性和阳性质控验证; 荧光染色应在每次实验时以阴性和阳性质控验证。 4.2.1.1.7真菌:直接染色(如抗酸染色PAS染色、吉姆萨染色、墨汁染色) 检查患者样品时,应在实验:当日做阴性和阳性质控(某些染色如吉姆萨染色, 玻片本身作为阴性质控)。 4.2.1.1.8病毒:连续细胞传代时应定期监测支原体污染(宜监测阴性未传代 的质控株,而不是培养支原体);应监测用于细胞生长培养液的动物血清的细胞 毒性;应具备相应的细胞株用于病毒培养。 4.3.2报告患者结果之前,应确认质控在可接受范围。 4.3.3经双人双核后的报告单交报告发放人员分发到各病房或门诊患者,注 意签收并记录