孕妇血浆中胎儿游离DNA及抗DNA抗体与子痫前期的相关性研究

孕妇血浆中胎儿游离DNA及抗DNA抗体与子痫前期的相关性研究 【摘要】 目的 探讨孕妇血浆中胎儿游离DNA及抗DNA抗体与子痫前期的相关性。方法 以Y染色体上性别决定基因为基因标志, 采用荧光定量PCR技术检测分娩后证实为男婴的34例子痫前期孕妇和42例正常孕妇血浆中胎儿游离DNA水平，采用ELISA法检测抗ss-DNA及抗ds-DNA抗体水平。 结果 观察组fDNA水平为，对照组为，两组比较，差异有统计学意义。观察组抗ss-DNA抗体水平为，对照组为，两组比较，差异有统计学意义。观察组抗ds-DNA抗体水平为，对照组为，两组比较，无统计学意义。fDNA与抗ss-DNA抗体无相关性，与抗ds-DNA抗体无相关性。 结论 监测孕妇血浆fDNA变化可作为预测子痫前期及诊断病情程度的一个指标。fDNA升高并非由抗DNA抗体所致。 【关键词】 DNA 抗DNA抗体 子痫前期 【Abstract】 Objective To explore the relationship of fDNA and antiDNA antibody in pregnant women with preeclampsia. s SRY gene is used as gene marker. Thirty-four cases of pregnant women with preeclampsia and forty-two cases normal pregnant women were selected. Both groups delivered male babies. The fDNA level in the plasma of the women were quantitated by PCR. Antibody levels of ss-DNA and ds-DNA were detected by ELISA. Result Mean fDNA level in test groups (±)was significantly higher than that (±)in control group (); Plasma level of antiss-DNA antibody levels in test group (±) was significantly higher than that (±) in control group (); however, plasma level of antids-DNA antibody had no significant difference (). No correralation was found between fetal DNA levels and antiss-DNA antibody or antids-DNA antibody in preelampsia group (r=,). Conclusion Detection of the variation of fDNA in the plasma of the pregnant women may help to forecast and diagnose preeclampsia, the rise of fDNA is not caused by antiDNA antibody. 【Key words】DNA AntiDNA antibody Preeclampsia 妊娠期高血压疾病是妊娠期特有的疾病，是导致孕妇和围生儿死亡的主要原因，目前其病因及发病机制仍未明确。近年来研究发现孕妇血浆中存在着胎儿游离DNA，妊娠合并子痫前期妇女血浆中胎儿游离DNA含量明显增高，且与疾病的严重程度相关。本研究采用荧光定量聚合酶链反应方法对不同程度妊娠期高血压疾病患者外周血浆进行SRY基因检测，以探讨孕妇血浆中胎儿游离DNA与妊娠期高血压疾病的关系，现将结果报道如下。 1 临床资料 一般资料 2005年5月至2006年11月在本院妇产科行产前检查并分娩后证实为男婴的孕妇共1359例，选取子痫前期34例为观察组，平均年龄岁，平均孕周周，正常妊娠42例为对照组，平均年龄岁，平均孕周周。两组患者既往无心、肺、肝、肾等疾病史，无高血压病史，无免疫系统疾病。子痫前期的诊断及分类标准以《妇产科学》为准。 方法 (1)标本采集：在分娩前，入院当天用抗凝管采取两组孕妇外周静脉血各3ml,血样本3000r/min离心，离心后血浆移入无菌管中，-80℃保存，待分娩后证实为男婴集中检测。(2)DNA提取：DNA提取采用TaKaRa Blood Genme DNA Extractoin Kit(宝生生物工程有限公司，中国)提供的DNA提取试剂，从血浆中提取胎儿DNA，操作步骤按说明书进行。(3)性别决定基因PCR引物设计：使用Y染色体上的SRY位点对男性胎儿DNA进行定量，正向引物5，-GCGACCATGAACGCATT-3’，反向引物5，-GCCATCTTGCGCCTCTGAT-3’，一个双标Taq Man-MGB 荧光探针为5’-ATCGTGTGGGTCTGAT-3’。(4)FQ-PCR定量胎儿DNA：PCR扩增反应体系采用Tag Man PCR 有Core Reagent Kit。反应体系总体积18μl，Taq Man PCR Mix：9μl,探针：μl，正向引物：μl,反向引物：μl，去离子水：μl。制备SRY基因DNA标准管×10、×102、×103、×104copies/ml，取样本及标准管各6μl加入到已加有反应液的扩增管加盖，2000rpm离心20s使混匀。在Light Cycler扩增仪上按以下程序进行扩增及计算样本中DNA的量：50℃ 3min;95℃ 10min：(95℃ 10s，60℃ 30s)循环45次，37℃5s。在60℃时收集荧光信号，方式为“Single”，通道为F1。本试验最低检测限为10copies/ml。(5)抗ss-DNA抗体及抗ds-DNA抗体定量:抗ss-DNA及抗ds-DNA抗体的定量均采用德国欧蒙ELISASHA试剂盒,在BIO-RAD酶标仪上进行吸光度检测,检测波长为450nm，严格按照实际说明书操作。 统计学方法 原始数据用SAS 统计软件处理，数据呈正态分布时比较用t检验，非正态分布时采用Wilcoxon符号秩和检验。 2 结果 两组孕妇外周血中胎儿游离DNA水平比较 观察组孕妇外周血中胎儿游离DNA水平明显高于对照组，有统计学意义，不同程度子痫前期患者孕妇血中胎儿游离DNA水平分别与对照组比较有统计学意义。见表１。 两组孕妇抗ss-DNA及抗ds-DNA抗体比较 子痫前期组孕妇血浆抗ss-DNA抗体与对照组比较有统计学意义。观察组孕妇血浆抗ds-DNA抗体与对照组比较，无统计学意义。见表１。表1 各组孕妇血浆中胎儿游离DNA水平和抗ss-DNA及抗ds-DNA抗体水平比较 孕妇血浆中胎儿游离DNA与抗ss-DNA及抗ds-