牛球虫病防治技术规范

DB54/T XXXX-XXXX 54 ICS 11.220 CCS B 41 西藏自治区地方标准 发 布 西藏自治区市场监督管理局 20XX-XX-XX实施 20XX-XX-XX发布 牛球虫病防治技术规范 （征求意见稿） DB54/T XXXX-XXXX 1 DB54/T XXXX-XXXX 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。 本文件由西藏自治区农业农村标准技术委员会提出并归口。 本文件起草单位：西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所。 本文件主要起草人：赵霞玲、夏晨阳、单曲拉姆、石斌、唐文强、刘增强。 5 牛球虫病防治技术规范 1 范围 本文件规定了牛球虫病的流行特点、诊断、预防、治疗、记录和人员防护。 本文件适用于西藏自治区境内牛球虫病的防治。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 牛球虫病 牛球虫病是一种由艾美耳科艾美耳属的球虫寄生导致的原虫病，可引起牛肠道急性炎、血痢等临床症状的寄生虫疾病。 3.1 球虫感染强度 OPG，每克粪便中含有球虫卵囊数。 4 流行特点 4.1 传染源 病牛和带虫牛是传染源。 4.2 传播方式 主要通过粪便传播，也会通过蜱虫、螨虫、虱子等吸血传播，饲料、饮水和垫草传播以及被污染的土壤和草坪也可传播。 4.3 发病季节 多发生于春、夏、秋三季，特别是多雨季节的高湿牧地及沼泽地。 4.4 发病日龄 高发于犊牛，主要集中在30日龄。 5 诊断 5.1 临床诊断 潜伏期为２至３周。主要表现为高烧40℃以上，腹泻，便血。成年牛多为隐性感染，临床上无异常表现。 5.2 病理变化 病变出现在盲肠、结肠和回肠后段处。肠黏膜充血、水肿，有出血斑和弥散性出血点，肠腔中含大量血液；直肠粘膜肥厚，直肠内容物呈褐色、有恶臭、纤维性黏膜和碎片。肝脏见黄白色斑点或结节。 5.3 病原学诊断 5.3.1 球虫卵囊检查 样品采集、保存与运输符合NY/T 541-2016。检查方法参照GB/T 18647规定执行。牛球虫卵囊形态见附录A。 5.3.2 基因检测诊断 基因检测诊断具体操作程序见附录B。 5.4 结果判定 5.4.1 根据5.1、5.2进行初步判断，符合特征可判定为疑似病例。 5.4.2 根据5.3.1检测出球虫卵囊，确诊为患病动物，当OPG＞10 x104，判定为严重感染；10×104＞OPG＞1×104，判定为中度感染；当OPG＜1×104，判定为轻度感染。 5.4.3 根据5.3.2检查出现特异性目的条带，确诊为患病动物。 6 预防 6.1 环境卫生 清扫积粪，堆积发酵处理；定期用5%次氯酸钠消毒圈舍，并确保牛舍清洁干燥；饲喂器具应经高温灭菌处理后方可使用。 6.2 加强饲养管理 合理安排饲养密度，减少应激。严格执行全进全出的饲养制度，加强饲养管理，增强体制、提高抵抗力，对犊牛及时饲喂初乳。避免到潮湿、低洼的草甸或草场放牧，远离传染源。 6.3 定期驱虫 每年春、秋两季分别对牛群进行1次驱虫。 6.4 防治密度 实行全群驱虫。 6.5 定期监测 定期进行粪便球虫卵囊检测，了解牛群的感染状况。 7 治疗 7.1 用药原则 严格执行说明书休药期规定，未规定休药期的药物，休药期不应少于28 d。定期轮换抗球虫药物，防止球虫产生耐药性。驱虫牛应在投药前空腹，并提前饮足水。 7.2 药物治疗 以感染强度和粪便垫料中孢子化卵囊量为主要监测指标，当其感染强度或粪便垫料中孢子化卵囊量超过一定数值（OPG≥10000）和出现典型临床症状时及时给予治疗。推荐药物：氨丙啉、氯苯胍、托曲珠利、磺胺甲氧嘧啶、地克珠利，使用计量及方法依据使用说明。 7.3 对症治疗 每隔三天用药一次，补充多维电解质、萄萄糖，并根据出血和继发感染程度,配合使用止血药和抗生素。 7.4 粪污无害化处理 牛投药后及时收集虫卵粪便，并进行堆积发酵无害化处理。 8 记录 做好防治记录，内容包括畜种、年龄、监测结果、防治数量、用药品种、使用剂量、管理措施，建立发病及防治档案。 9 人员防护 应穿防护服、长筒靴子，戴手套和口罩等开展牛球虫病相关防控工作。 A A 附 录 A （资料性） 牛球虫卵囊形态特征 种类 长度 （μm） 宽度 （μm） 形状 颜色 极帽 卵囊残体 孢子囊残体 阿拉巴艾美耳球虫 13-24 11-16 梨形 无色的 无 无 无 奥博艾美耳球虫 32-46 20-25 长卵球形（一端扁平） 黄褐色 有 无 有 牛艾美耳球虫 23-34 17-23 卵球形 无色 有 有 有 巴氏艾美耳球虫 33-43 24-30 椭圆形 黄褐色 有 无 有 皮利他艾美耳球虫 36-41 26-30 梨形 深棕色 有 无 有 加拿大艾美耳球虫 28-37 20-27 椭圆形或稍卵球形 无色或淡黄色 有 无 有 柱状艾美耳球虫 16-27 12-15 长椭圆形 无色的 无 无 有 椭圆艾美耳球虫 20-26 13-17 椭圆形或稍卵球形 无色的 无 无 有 亚球形艾美耳球虫 9-14 8-13 近球形 无色的 无 无 无 怀俄明艾美耳球虫 37-45 26-31 卵球形 黄褐色 有 无 无 邱氏艾美耳球虫 15-22 13-18 近球形 无色的 无 无 有 拔克朗斯艾美耳球虫 47-50 33-38 椭圆形或稍卵球形 黄褐色 有 无 无 B B 附 录 B （规范性） PCR检测方法 B.1 材料准备 B.1.1 试剂 电泳缓冲液(TAE buffer),基因组DNA提取试剂盒、2×PCR Mix、DL2000 DNA Marker 、Ts-GelRed、琼脂糖等。 B.2 操作方法 B.2.1 粪便样品采集 采集的粪便样品分别装入洁净的自封袋中，标明编号、采集地、性别及畜种后带回实验室保存待检。 B.2.2 基因组DNA提取 每个样本粪便取3~5 g加入50 mL灭菌蒸馏水并捣碎，再用60目筛网进行过滤。将滤液3500 r/min离心10 min，弃上清，保留沉淀。然后用按照粪便基因组DNA提取试剂盒说明书进行提取，提取的DNA于-20℃保存。 B.2.3 PCR操作方法 参照文献中提及的牛球虫检测引物(见表1)。 物种 基因名称 引物序列5´- 3´ 退火温度/℃ 产物大小/bp