SF_T 0178-2024 血液中溴敌隆等13种抗凝血类杀鼠药的液相色谱-质谱定性定量检验方法

ICS 07.140 CCS C06 SF 中 华 人 民 共 和 国 司 法 行 政 行 业 标 准 SF/T 0178—2024 代替 SF/Z JD0107018—2018 血液中溴敌隆等 13 种抗凝血类杀鼠药的液 相色谱-质谱定性定量检验方法 Qualitative and quantitative determination of 13 anticoagulant rodenticides including bromadiolone in blood by liquid chromatography-mass spectrometry 2024 - 12 - 30 发布 2025 - 06 - 01 实施 中华人民共和国司法部 发 布 SF/T 0178—2024 I 目次 前言 . II 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 术语和定义 . 1 4 原理 . 1 5 试剂、仪器和设备 . 1 6 定性分析 . 2 7 定量分析 . 4 8 分析结果评价 . 5 附录 A（资料性） 目标物的相关信息及方法线性范围、检出限与定量限 . 7 SF/T 0178—2024 II 前言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替SF/Z JD0107018—2018《血液中溴敌隆等13种抗凝血类杀鼠药的液相色谱-串联质谱检 验方法》，与SF/Z JD0107018—2018相比，除结构调整和编辑性改动外，主要技术变化如下： a) 增加了目标物的“英文名称”（见附录 A）； b) 增加了目标物的“CAS 号”（见附录 A）。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由司法鉴定科学研究院提出。 本文件由司法部信息中心归口。 本文件起草单位：司法鉴定科学研究院、四川大学、华中科技大学。 本文件主要起草人：严慧、乔正、刘伟、廖林川、黄垂秀、叶懿、林瑶、向平、沈保华、王鑫、卓 先义、沈敏、吴何坚。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为： —— 2018 年首次发布为 SF/Z JD0107018—2018； —— 本次为第一次修订。 SF/T 0178—2024 1 血液中溴敌隆等 13 种抗凝血类杀鼠药的液相色谱-质谱 定性定量检验方法 1 范围 本文件描述了血液中溴敌隆、溴鼠灵、克灭鼠、异杀鼠酮、杀鼠酮、华法林、杀鼠醚、氯杀鼠灵、 敌鼠、敌害鼠、氯鼠酮、鼠得克和氟鼠灵13种抗凝血类杀鼠药的液相色谱-串联质谱检验方法，包括原 理，试剂、仪器和设备，定性分析，定量分析以及分析结果评价。 本文件适用于血液中溴敌隆、溴鼠灵、克灭鼠、异杀鼠酮、杀鼠酮、华法林、杀鼠醚、氯杀鼠灵、 敌鼠、敌害鼠、氯鼠酮、鼠得克和氟鼠灵13种抗凝血类杀鼠药的定性分析和定量分析。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 血液样品经乙酸乙酯液液提取后，采用液相色谱-串联质谱仪进行检测，经与平行操作的空白样品 和添加样品作对照，以保留时间、质谱特征离子对峰和离子对丰度比进行定性分析；以定量离子对峰面 积或峰面积比值为依据，采用外标法或内标法进行定量分析。 5 试剂、仪器和设备 试剂 试验用水应为符合GB/T 6682规定的一级水。所用试剂及要求如下。 a) 甲醇：色谱纯。 b) 乙酸铵：色谱纯。 c) 乙酸乙酯：分析纯。 d) 丙酮：色谱纯。 e) 含 5%甲醇的 10 mmol/L 乙酸铵溶液：分别取乙酸铵 0.77 g 和甲醇 50 mL，置于 1000 mL 容量 瓶中，加水定容至刻度，摇匀备用。 f) 标准物质溶液： 1) 标准物质储备溶液： 分别精密称取溴敌隆、 溴鼠灵、 克灭鼠、 华法林、 杀鼠醚、 氯杀鼠灵、 敌害鼠、 鼠得克和氟鼠灵标准物质适量， 用甲醇配制成 1.0 mg/mL 的标准物质储备溶液。 分别精密称取异杀鼠酮、杀鼠酮、敌鼠和氯鼠酮标准物质适量，用丙酮配制成 1.0 mg/mL 的标准物质储备溶液。密封，置于冰箱中冷冻保存，有效期 12 个月，或采用市售标准溶 液； 2) 标准物质工作溶液：试验中所用其他浓度的标准物质工作溶液均由符合 5.1 f）1）的标 准物质储备溶液用甲醇稀释得到。密封，置于冰箱中冷藏保存，有效期 3 个月。 g) 内标溶液： SF/T 0178—2024 2 1) 内标储备溶液：市售 100 µg/mL 华法林-d5（或其他合适内标物）内标储备溶液，置于冰 箱冷冻保存，有效期 12 个月； 2) 内标工作溶液：100 ng/mL 的华法林-d5内标工作溶液由符合 5.1 g）1）的内标储备溶液 用甲醇稀释得到。密封，置于冰箱中冷藏保存，有效期 3 个月。 仪器和设备 仪器和设备及要求如下。 a) 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。 b) 电子天平：分度值≤0.1 mg。 c) 旋涡混合器。 d) 离心机。 e) 恒温水浴锅。 f) 移液器。 6 定性分析 样品前处理 6.1.1 检材样品 取血液1 mL，加入内标工作溶液10 µL，加入乙酸乙酯3 mL，涡旋混匀，2500 r/min离心3 min，转 移乙酸乙酯层。检材样品中再加入乙酸乙酯3 mL，涡旋混匀，2500 r/min离心3 min，转移乙酸乙酯层， 合并两次的乙酸乙酯提取液，于60 ℃水浴中吹干，残留物用甲醇100 L复溶，供液相色谱-串联质谱仪 分析。 6.1.2 空白样品 取空白血液1 mL作为空白样品，按照6.1.1的方法，与检材样品平行操作。 6.1.3 添加样品 取空白血液1 mL，添加标准物质工作溶液，配制成2 ng/mL的添加样品，然后按6.1.1的方法，与检 材样品平行操作。 仪器检测 6.2.1 仪器条件 6.2.1.1 液相色谱条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器等实际情况进行调整。 a) 色谱柱：C18 柱（100 mm×2.1 mm，3.5 µm）或其他等效柱。 b) 流动相：流动相 A 为含 5%甲醇的 10 mmol/L 乙酸铵溶液，流动相 B 为甲醇；采用梯度洗脱， 梯度洗脱程序见表 1。 c) 流速：0.2 mL/min。 d) 柱温：室温。 e) 进样量：5 µL。 表1 流动相梯度洗脱程序 时间 min 流动相A 流动相B 0 80% 20% 1.5 80% 20% 3.0 40% 60% 5.0 40% 60% SF/T 0178—2024 3 表 1 流动相梯度洗脱程序（续） 时间 min 流动相A 流动相B 5.5 15% 85% 7.5 15% 85% 10.0 80% 20% 6.2.1.2 质谱条件 6.2.1.2.1 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器等实际情况进行调整。 a