部分发酵产品生产工艺及培养基配方#

部分发酵产品生产工艺及培养基配方部分发酵产品生产工艺及培养基配方 我国 1958 年才开始赤霉素的研究、生产和推广应用，并于 1969 年因为党的“九 大召开及国庆 20 周年，故把赤霉素称之为 九二 O”．2 5n m’发酵罐工业化生 产试验 2．1 试验材料与方法 2．1．1 菌种：G—l14 2．1．2 试验地点：湖南生物制药厂． 2．1．3 培养基 ① 种子培养基(w／w)：葡萄糖 1．5,糊精 1．0,花生粉 1．5,MgSO4·7HzO 0． 1,KH2PO4 0． 1,消泡剂 0． 2,自来水配制， 自然 pH 值,6m3 种子罐中投料 3m3 ， 实罐消毒 121℃ ，30 分钟，冷却至 28℃待接种。 ② 发酵培养基(w／w)：玉米淀粉 7．0,饴糖 2．5；豆饼粉 0．3,花生粉 1．0,MgSO4·7H2O 0．07,KH2PO4 0．14；消沫剂0．05， a 一淀粉酶 0.05，50m3 发酵罐投料 40m3。pH 值自然，实罐消毒 121“C，30 分钟，冷却至 28℃后接入种 子培养液． 2， 1． 4 发酵设备； 种子罐 6 m3， 二档搅拌． 发酵罐体积 50m3。 ， 三档搅拌． 流 加罐用 另一种子罐代替． 2．1．5 发酵条件 种子罐：培养温度28℃ 士 I℃ ，通风量l：I v／v，罐压0．4—0．5 kg／cm2． 发酵罐：培养温度 28 士 l℃ ，通风量 l：0．7 v／v，罐压 0．1—0．15 kg／ cm2． 赤霉素发酵参考环境：10～60 吨罐，搅拌转速115 转/分，通风量1：1/分， 培 养温度大多采用 29℃～32℃ 。培养基的起始 pH 值控制在 5.5 左右，而将发酵 过程的pH值维持在3.5～4.5之间为宜。 种子培养基： 葡萄糖0.3g， 蒸馏水lOOml。 豆饼粉 1.5g，淀粉 1.Og，葡萄糖 1.Og，KH2PO4 0.lg，(NH4)2SO4 0．05g，MgSO4 0.1g，自来水 lOOml。 发酵培养基：豆饼粉 0.9％．淀粉 7.0％，葡萄糖 1.0％，KH2PO4 0.15％， MgSO40.08％， a-淀粉酶 0.003％，pH 5～5.5 发酵周期 130 小时 阿维菌素： 种子培养基( g/L)：淀粉 30，豆饼粉 20，酵母粉 2.0，CoCl2·6H20 0.0005,pH 7．0～7．2。 发酵培养基(g／L)：淀粉 50，玉米粉 l0，酵母粉 l0，豆饼粉 10．CaCO3 2.0， CoCl2·6HaO 0．0005，pH 7.0～ 7.2。 妥布霉素发酵培养基： 黄豆饼粉 2.5； 葡萄糖 1.O； 玉米粉 1.O； 玉米淀粉 1.5； (NH4)2SO4 0.5；鱼粉 O.4；MgS04 0.6； 油 1.0；ZnSO4 0.05；CaCO3 0.6;温度 37℃,发酵时间 112h 左右。发酵菌种采用黑暗链霉菌。 1 / 9 洛伐他汀培养基： 淀粉， 黄豆饼粉， 葡萄糖， 玉米浆， K2HPO4， (NH4)2S04， CaCO3， 发酵菌种采用红曲菌株，M.ruber。发酵周期 10 天。 甾体激素氢化可的松菌种:蓝色犁头霉(As365)，培养基(%) 葡萄糖 1.O，酵母膏 0.23， 玉米浆 1.5， 硫酸铵 0.5； pH 值 6.4～6.5； m1)， 28℃ 培养 24h， 投入 0.25% 的 RSA（发酵底物醋酯化合物：17a 一羟基孕甾一 4 一烯一 3，2O 一二酮一 21 一醋酸酯，RSA），然后转化 36～42h。 综上所述，在利用整肠生菌(Bacillus Licheniis)等杆菌发酵生产杆菌肽 中，因为前期微生物生长繁殖迅速，碳源消耗量较大。在发酵中后期的碳源主要 用于杆菌肽次级代谢产物的合成，故碳耗较平稳。所以碳源不宜过多，2％～3％ 为宜。同时杆菌肽生产与其它抗菌素生长碳源不同，实验表明，加入3％柠檬酸 作为碳源最佳，以保证菌体迅速生长。如果中后期碳浓度过高，会引起菌体生长 太快，而减少杆菌肽合成。所以，对碳源种类的选择和控制至关重要，在选择适 合种类碳源的条件下，碳源量的控制方法可采用碳比消耗速率、菌体比生长速率 和控制流加碳源速度。同时， 因为过量磷酸盐对杆菌肽前体氨基酸形成有抑制作 用，从而干扰杆菌肽的合成。所以，无机磷酸浓度应控制在 0．1～1．0 mmol／ L，以便既能满足菌体生长需要又不影响杆菌肽的合成。此外用整肠生菌发酵生 产杆菌肽，发酵 pH 为 7．5，发酵时间为 40 h 为宜。 杆菌肽是利用整肠生菌发酵 pH 为 7．5，发酵时间为 40 h 杆菌肽发酵参考环境：5～100 吨罐，搅拌转速 100 转/分，通风量 1：1/分，罐 压 0.7 公斤， pH 7.5 左右，培养基主要成分为液化淀粉,豆粕，柠檬酸，各种 无机盐适量，发酵菌种采用整肠生菌,发酵周期 40 小时。 井岗霉素属氨基环醇类抗生素， 是一种抗水稻纹枯病的农用抗生素， 具有药效高， 无毒副作用，持效时间长的特点，是一种重要的农用抗生素。井岗霉素产生菌是 在我国井岗山地区土壤中分离出的吸水链霉菌的一个变种， 定名为吸水链霉菌井 岗变种(Steptomyces Hygroscopicus Var Jinggangensis)，属好氧放线菌。井 岗霉素的工业生产过程如下：筛选后的菌种经固体增殖培养后，接入种子罐，在 40 C 下，通气培养 20 h 后，移入发酵罐，在 40C．通气量 0．5～0．8 vvm 条件 下，发酵 40 h 放罐，将发酵液过滤后，浓缩至所需浓度，成品包装。 井岗霉素 1976 年通过鉴定并开始工业生产，但因为种种原因对其发酵过程并未 进行系统地研究。同时，发酵工艺也维持在传统的间歇发酵方法，因而井岗霉素 发酵的水平(俗称效价)一直徘徊在一万单位(ug/mL)左右，仅为实验室发酵水平 的 70%。 宁南霉素水稻自叶帖病是水稻生产上的三大病害之一． 化学农药虽然有控制该病 的作用，但造成环境和农产品污染，直接影响人、畜健康，宁南霉素为首次发现 的胞嘧啶核苷肽型新抗生素． 它是一种高效， 低毒， 低残留的广谱性农用抗生索。 它对水稻白叶枯病平均相对防治效果为 70%左右．高的可达 90%，一般增产效果 为 l0—20%，高的可达 35%．另外它对小麦．蔬菜，花卉等白粉病的防病，增产 效果都很显著， 对水稻小球菌棱病和油橄榄孔雀斑瘸、疮痂病也有良好的防治效 果。 宁南霉：玉米粉2 %淀粉 1%．花生饼粉3%，酵母粉0.05%，无机盐按原用量NaCl 0.5%，CaCO3 0.5 %，MgSO4 0.0025%，(NH4)2SO4 0.25%，K2HPO4 0.02%不变。 2 / 9 1．1-l 菌种： 诺尔斯链霉菌西昌变种。 1．1．2 培养基： 孢子斜面培养基(％)：可溶性淀粉2 蔗糖 1，硝酸钾1，磷酸氢二钾0．5，硫酸 镁 0．5，氯化钠 0．5，碳酸钙 0．5，硫酸亚铁 0．01，琼脂 2，灭菌前 pH7 2～ 7．4。 种子培养基(％)： 玉米粉 2，黄豆饼粉 3，酵母粉 0．01，磷酸氢二钾 0．01， 硫酸镁 O．00