药效学实验设计方法

自主设计实验（中药方剂药效学实验）点评总结 中药学院药理教研室沈旭华 【题目】 明确限定主题内容 动物实验还是临床试验 基本要素：处理因素（药物） 受试对象实验效应 语法结构：偏正词组（核心，最常用） 【目的】 1．评价及掌握实验方法 实验方法名称及应用价值；注意方法中所检测的指标与药物效应之间的内在对应关系。 根据实验目标，比较相同意义的不同实验方法的利弊，作出合理的方法选择。 （参见《高血压大鼠模型的研究进展》 （王东，蒋湘莲．中国动脉硬化杂志， 2006，l4（3）： 271-273，276）） 2．观察药物的效应（期望） 1）受试药物的效应（有或无；利或弊） 反映效应的指标选择要求：兼顾客观性、特异性、精确性、灵敏性 2）比较作用差异：效应性质；同质：强度、起效、维持 同一药物不同剂量 同一原料不同产地来源、培育方法、炮制、加工等 方剂加减（味、量） 同一效应不同药物 【原理】适当解释（注：科研论文无此项，相应内容在【讨论】中体现） 1．建立病理模型的依据与评判标准，阐明其病理机制； 2．病理模型与临床病症（证候）的对应关系，即病理模型如何模拟临床病症； 3．指出阳性对照药防治病理模型的依据； 4．病理模型与受试药应用时机的关系，即采用预防还是治疗说明药物的效应； 5．指标选择及其与效应的对应关系； 6．造模与不造模意义有何不同。 【材料】 药品（试剂）： 制剂的完整表达：浓度（%、g/ml、U/ml、mol/L、…） 药（剂）名称剂型； 凡属商品则还须注明：规格，厂家，批号。 1）造模剂：所造病症（证候）模型应成熟、可靠、稳定 2）受试药： （1）方剂及其加减，即通过组方和拆方，探讨方剂配伍规律（君臣佐使增效减毒） （2）单位中药不同方法的炮制品、提取物（有效部位）等 （3）单味或复方固定的中药制剂：如，复方丹参注射液 （4）同类成分：如，灵芝多糖 （5）单一组分：如，延胡索乙素 凡不是商品药物， 都须说明药物的组成 （种类及数量） 、 加工制备／提取过程， 最终浓度 （代 表成分含量或生药含量m（g）/L ） 3）阳性对照药：西药或中药选用的要求： （1）合法性：《中国药典》收载或符合部颁标准，或新批准合法生产的药物。 叮叮小文库 （2）可比性：其功用（作用环节或机制）、主治、剂型（给药途径）与受试药相似。 （3）择优选用：有多种同类药可供选用时，应择优选用公认疗效较好的药物。 2 4）阴性对照药：如，NS 5）检测所需试剂：常配在相应指标检测试剂盒中，若有缺则应另外准备 6）其他试剂：如，细胞培养基 如果药物使用前经过调配的，应注明配制方法。 动物：物种年（周、月）龄体重性别级别来源合格证（生产／饲养／使用） 器材： 常规器材可简略：例如，称重：电子称或天平与砝码给药：注射器（ 1.0ml、2.0ml、5.0ml） 与针 头（4 号、5 号），大鼠或小鼠灌胃器 指标检测的特殊仪器／主要仪器：标明：型号／规格仪器名称 【方法】药效学的动物实验设计尽可能与临床病症防治要求及依据相一致 设计方案： 治疗性或预防性：前者更有临床指导价值，后者有助于探索机制。 分组： 组别：正常（空白）组、模型组、阴性对照组、阳性对照组、实验组（多组等比剂量：如， 高、中、低；不同药物之间构成相互对照）；（参见【结果】部分表格） 正常（空白）组、模型组有时可被省略。 方法：必须采用随机方法。例， 按体重自低到高排序编号，依随机数字表法或随机排列法分 组。 数量：满足统计学要求； 基本规律： 物种个体（体重）越小，其所需数量越多； 例如：计量资料，通常每组小鼠至少10 只，大鼠至少6~8 只。 变异程度越大，则需动物数量越多。 给药量： 先确定总量及每日给药量（g g（生药／有效成分）／kgkg体重） 1．根据文献直接引用（同物种、同效应）； 2．跨物种换算关系求出等效剂量； 根本依据：按单位体重体表面积之比确定单位体重给药量的倍数关系。 一般规律：物种个体（体重）越小，该物种单位体重给药量越大。 3．1 和2 所得经预试后，往往还需作出调整以确定正式实验时的给药剂量。 再根据适宜的单位体重给药容积（如，小鼠：0.1~0.4ml/10g）确定药物的配制浓度。 给药方法：给药途径每次给药量一天×次共给×天或×次 给药时机如，首次给药：造模前／后第×天；连续给×天或第×、×、…天各给一次。 关键操作（尤其检测、处理）步骤、方法与时间节点： 凡具体操作引用文献且文献中相应陈述足够详尽者，则不必细述，但必须标明文献出处 观测指标的时间及次数 实验观测的期限及依据 原始指标的观察与检测方法 统计分析及方法： 统计指标与换算方法： -2 叮叮小文库 例如，药物有无降压效应，原始观测指标为血压值，有意义的统计指标是血压差值。 药物有无抗炎效应，原始观测指标为足跖容积，有意义的统计指标是足跖肿胀百分率。 足跖肿胀百分率（%）==（致炎后足跖容积— 致炎前足跖容积）／致炎前足跖容积×100% 数据表达：计量资料：均数±标准差（X±S）（假定数据服从正态分布） 检验水平：α=0.05，一般取双侧（因事先不能肯定相比较的两者一定是“＞”或“＜”的 关系） 统计软件：名称及版本号，如：SPSS 12.0；SAS 5.0 药效学中最常涉及如下的统计检验：（具体选用方法与实验设计及数据特征等相关） 计量资料检验：单因素方差分析组间比较用q检验 计数资料检验：χ2检验 3 不同具体情况的统计检验归纳如下： （摘自王洁贞主编，《医学统计学》，2002 年第1 版，郑州大学出版社，P117） 4 【结果】 假设上表内容为观察受试药对病理模型有无治疗作用， 则2 组可省去， 若造模以自身前后为 对照作判断，则1 组也可省去，3~11 组都先造模后用药。 若指标值属计量资料，且假定各组数据呈正态分布， 则其统计分析可用单因素方差分析， 组 间比较用q检验。 统计分析过程： （统计软件在输入原始数据后按程序运行即可给出最终所需统计结果， 但具 体统计方法必须由人合理选择，故必须知道其统计学原理） 按上表3~11 组实验设计为例： F值法判断各组总体均数相等或不全相等。 若各组总体均数相等，则表明造模未成功，实验失败。 若各组总体均数不全相等，则可用q检验作组间两两比较。 3 造模前后比较，若差别有统计学意义且为期望方向改变，则表明造模成功（a）； 4 与3 造模前后同时段比较，若差别有统计学意义且为改善作用，则表明阳性药发挥药效 -3 叮叮小文库 （b）； 同时满足（a）和（b），则实验体系可靠，可用于检验受试药物有无效应。 5~11 分别与3 比较， 若差别有统计学意义且为改善作用， 则表明相应剂量的药物发挥药效。 5~7 之间、8~10 之间的比较体现作用强弱有无剂量依赖性。 6 与11、9 与11 之间的比较体现不同药物之间效应有无协同性。 5 与8、6 与9、7 与10 之间的比较体现等量的不同药物效应有无差异。 【讨论】 预期结果与解释分析。 实验设计严格遵循随机、 对照和重复的原则是实验结果有效可信的先决条件， 也是实验结果 可作统计分析的根本前提，否则实验结果和统计分析毫无意义。 根据数据的统计分析，在确定造模、阳性对照成功的