沙门氏菌快速检测技术

沙门氏菌快速检测技术研究进展 摘 要：沙门氏菌是食品中最常见的致病菌，是导致食物中毒的重要病原菌之一，严重危害人类的健康安全和食 品安全。传统的细菌学检测耗时繁琐，不能满足当今发展的需求。本文简要介绍了近年来沙门氏菌快速检测技术研 究进展，并分析各种检测方法的优缺点，以期寻找一种快速、简便、特异、灵敏，能检测绝大多数血清型沙门氏菌 的方法。 关键词：沙门氏菌；快速检测、免疫学技术、分子生物学技术 Research Progress on the Rapid Detection of Salmonella Zhao Hui (College of Food Science and Engineering , Northwest A&F University , Yangling, Shaanxi 712100, China) AbstractAbstract：：Salmonella is the most common pathogenic bacteria in food, which can cause bromatoxism and bring about hazard on human , The traditional bacteriology detections have not bee satisfied the requirement of development because of time -consuming. This review briefly introduced research progress of the rapid detection of Salmonella in recent years and analyzed the advantages and disadvantages of various detection s， hoping to find a fast， simple， specific and sensitive that could detect the majority serotypes of Salmonella． Keywords:Keywords: salmonella；rapid detection；immunological techniques；molecular biological techniques 随着国民经济的发展，食品、海产品中存在的卫生隐患问题愈发严重，在世界各地的食物中毒 中，沙门氏菌引起的中毒病例占首位或第 2 位，在中国，每年由沙门氏菌引起的食物中毒事件占到 全部食物中毒事件的 40% -60%[1]。沙门氏菌是常见的重要食源性致病菌，它们广泛分布在河口、海 水及沉积物、水产养殖等区域，寄生在海洋生物体中，通过污染的动物源性食品感染人类，导致食 物中毒，严重危害人体健康。目前我国食品中致病菌的检验普遍采用传统的细菌学检验方法和血清 学方法，这些方法一般都复杂繁琐、耗时费力，大致需要 4 d~6 d 才能出检验结果，难以应对突发 事件的发生。因此，建立一些快速、简便、准确度高的检测方法一直是沙门氏菌检测研究的核心问 题。随着生物技术的进步，在食源性致病菌检测领域出现了许多比传统方法更快捷、敏感性更好的 新技术，如免疫学检测技术和分子生物学检测技术等。本文总结了一些食品中沙门氏菌的快速检测 方法，从以传统方法为基础发展到以免疫学为基础的或以分子生物学为基础的快速检测方法，以期 加快检测工作的进行 。 [2] 1 免疫学检测技术 在所有食品中的沙门氏菌的检测技术手段中，免疫学检测技术占有重要的地位，主要是因为其 价格低廉，不需要特定的实验仪器，容易在基层推广开来。免疫学技术以抗原和抗体的特异性结合 反应为基础，通过病原体刺激机体产生免疫球蛋白（抗体），再辅以免疫放大技术来进行检测。抗 原和抗体的结合反应可在很短时间内完成，同时由于敏感的标记技术及示踪技术的应用，使得沙门 氏菌可在较短的时间内超微量而特异地检出。目前已建立的沙门氏菌免疫学检测方法主要有以下几 种： 1.1 免疫荧光技术(IFT) 免疫荧光技术是根据抗原抗体反应的原理 , 先将已知的抗原或抗体标记上荧光素,制成荧光抗 体, 再用这种荧光抗体(或抗原)作为探针检测组织或细胞内的相应抗原(或抗体) 在组织或细胞内 形成的抗原抗体复合物上含有标记的荧光素, 利用荧光显微镜观察标本, 荧光素受外来激发光的照 射而发生明亮的荧光（黄色或橘红色），可以看见荧光所在的组织细胞，从而确定抗原或抗体的性 质、定位，以及利用定量技术测定含量。 免疫荧光技术主要有直接法和间接法。直接法是在检测样品上直接滴加已知特异性荧光标记的 抗血清，经洗涤后在荧光显微镜下观察结果。直接法还可以清楚地观察抗原并用于定位标记观察。 赵文学[3]等直接将沙门氏菌固定在载玻片上,再用荧光标记抗体染色,通过荧光显微镜观察染色效果, 建立了沙门氏菌直接免疫荧光检测技术,该技术染色程序简单、操作方便,具有一定的应用价值。间 接免疫荧光法在实践中用途较广，是在检样上滴加已知的细菌特异性抗体，待作用后经洗涤，再加 入荧光标记的第二抗体，一抗与结合有荧光色素的二抗结合，所发出的荧光可由免疫荧光显微进行 检测。黄愈玲[4]等人进行了间接免疫荧光技术快速检测沙门氏菌的研究,实验结果表明沙门氏菌经免 疫荧光染色后,其形态结构与革兰氏染色的沙门氏菌相同， 检测样品经丙酮固定化和一抗二抗分别作 用30min后,用FITC标记物对其染色,通过荧光显微镜观察染色结果,检测结果与常规检测方法一致。 此检测方法具有操作简便、准确、灵敏、快速等优点,有较强的应用价值。 1.2 酶联免疫吸附技术（ELISA） 酶联免疫吸附技术是建立在免疫酶基础上的一种新型免疫测定技术，具有特异性强、敏感性高 等优点，可以在短时间内准确地将有害微生物检测出来。其基本原理是把抗原（抗体）预先结合在 某种固相载体表面，然后加入受检样品和酶标抗原（抗体），使其与结合在固相载体上的抗原（抗 体）发生反应，形成抗原抗体复合物，经洗涤去除反应液中其他物质，加入酶反应底物后，底物被 固相载体上的酶催化变为有色产物，颜色反应的深浅与样品中相应抗体或抗原的量呈正相关[5]。故 可根据呈色的深浅进行定性分析或通过酶标仪进行定量测定。由于酶的催化效率很高，间接地放大 了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。 20 世纪 80 年代, 建立了抗沙门氏菌各种 O 抗原、 H 抗原单抗技术,取代常规因子血清进行血 清学鉴定。沙门氏菌研究者获得了4 株具有沙门氏菌广谱结合特性的单克隆抗体,其中 2 株的反应互 补, 对已检菌株覆盖率达到 99%,而对其它受试肠杆菌均无交叉反应。文其乙[6]等在前人基础上应用 沙门氏菌属特异性单克隆抗体 CB8 和 de7 建立了检测沙门氏菌的直接 ELISA 方法, 并形成了快速 检测试剂盒, 此外, 还应用直接 ELISA 方法对 500 份蛋品检测, 结果表明该方法可靠, 且阳性率比 国标方法高。田银芳等应用直接 ELISA 法对 350 份奶样进行沙门氏菌的检测, 与常规方法相比