dish黄韧带骨化细胞成骨相关mirna的初步研究

天津医科大学 硕士学位论文 DISH黄韧带骨化细胞成骨相关miRNA的初步研究 姓名：赵华健 申请学位级别：硕士 专业：临床医学；外科学；骨外 指导教师：雪原 201105 H益成为研究的热点，本课题采用A公司最新版妒AAAA 检测弥漫性特发性骨质增生症AAAAaaaaaaaaa aAAA, AA细胞中差异表达的AAA,筛选 AA相关成骨AAA,并采用AAAAAA验证芯片结果的准确性，生物信 息学分析其作用靶基因，探讨其在AA发生发展中的作用，研究结果为探明 AAA调控AA发生的机制，及今后研究其预后指导价值提供理论指导和实 AAAAAAAAAAA. 基因预测，得到差异AAA调控的靶基因。取差异AAA调控的特异性表 达的基因进行功能显著性分析，基于AAAAAA数据库，对靶基因进行功能 天津医科大学硕士学位论文 AAA AAAAA AAA AAAAAA AAA AAAAAAAAAAKA 酉 AA AAAAA AAA AAA AAAAAAA AAAAA AAAA AAA AAAAA AAAA AAA A AAAAAAAAAA AAAAAAAAAAAAAAA AAA AAAA AAAAAA AAAAAAA AAAA. AAA AAAAAAAA AAAAAAAAA. A AA AAAAAA AAAAAAAA 励［Aaaaaaa AAAAA AAAAAAAAA. AAAAAAA AAAA AAAAA, AAA A AAA AA aAAAA AA AAA A A AAAAAAAA AA. AAAAAAAAAAA AAAAAA. AAAAAAA AA AAA AA AA AAAAAA AAA AAAAAA AAA AAAAAaaa. aaaaaaaaaa AAA, AA AAA A AAA AA aA A AAAA AAAAA AA A 000 0000000 0 0 0 000 00 000 0000000000 00 000 000000000000. 000000000 000000 000000000 o 0 00 o ooo 0 000 000 00. 0000000. 00000000000 000 000000 0000000000000 00 00 00000000 0 00000. 0 000000 OOOoooo 0000. 00000, 000000000000000 000 000000o 0 00000000000000 000000 00 00 000 000000狙 00000000000000. 000000 0000: 0000 ooooOOOOO 000 000000 00000 000 00000 特发性弥漫性骨质增生症 000000 后纵韧带骨化 00 逆转录聚合酶链反应 00 000 00 澳 00 原始微小核糖核酸 微小核糖核酸前体 000000 京都基因与基因组百科全 00 000000 0000 0000 00 弥漫性特发性骨肥厚症DDDDddddddddd 种常见的随年龄增长而逐渐增多的独特的临床疾病，多见于D岁以上人群，发 病率较高，目前国内尚未见流行病学报道，国外研究统计的发病率也不同。DD 的病因尚未明确，对其病因了解并不多，虽然遗传、代谢、内分泌、解剖、环 境和有毒因素目前被认为在新骨生成可能起到作用。一般认为病因是多方面的. 并且是不同于其他以脊柱退行性改变为特点的一种独立的疾病。在天津地区， DDDDDDDE）旦焕嗟髓队苑潜嗦氟亩绦姑螺D片段，长度大约为 DDDDJfiDD形成ODD复合物，通过直接剪切靶 DD或者与靶明的非翻译区互补结合，抑制靶DD的翻译、影响蛋向 利用手术减压整块切除的骨化黄韧带组织和正常胸椎黄韧带组织，分离培 养，获得高纯度的具有成骨功效的软骨细胞和成纤维细胞，并行免疫荧光鉴定。 一、ii黄韧带骨化细胞培养及iii谱的筛选 i i材料和方法 广州威佳公司，中国 niiiiii公司，美国 成都科隆生物化学试剂厂 重庆东方试剂厂 iii. iii公司，美国 iiii公司，美国 亩缓冲液卜i 贺立氏二氧化碳培养箱 上海安亭科学仪器厂，中国 ii高速离心机 激光扫描仪ii 岛津公司，日本 微循环泵杂交仪 i i i i i公司，美国 iiii公司，美国 委员会的支持。 ii. ii标本采集 ii. ii细胞分离、纯化与培养 i染色病理切片 对获得的黄韧带骨化组织行i染色。实验步骤: 门衅［呵衅门衅i i^ii 道各iii, ii/ 凭i道各i 沈涤iii次，ii%多聚甲醛溶液固定i分钟。 iii洗涤iii次，然后分别加入iii稀释的二抗：异硫氤酸荧光 i i i洗涤i i i次，在室温下细胞核用i微克/毫升碘化丙度i i染 iii,并用枪头吹打几次，确保全部裂解，然后吸至离心管中。 i i i冉i i吩i i i i嫦路跤i i i i购说鞍滋逋耆u掷掰cm ⑴加入⑴国仿,剧烈震荡i i i i缓管i『i蹑i的上层无色水相至一新的离心W=iiT i套管中，吸取酶的水 至滤柱内，轻轻地关上管盖，在室温下按iii i胄腊iii 0赐桁i。紫外 i. i i i直鸩舛）. i iiiii 度和完整性。 i水中，冷却至ii, i 电泳缓冲液和ii的i %甲醛溶液iii i。 成分 胶板放入电泳槽内，加足量的i i i电泳缓冲液至覆盖胶面几个毫米。 ii贤馔干涔尼鹿郸毂a恼ii和ii颂翘箱i的带亮而浓，上面一 将会在i i颂翘金幻带的上面出现，即更高分子量的弥散迁移物质或者带。 i i慕到獗酮治z颂翘金念i带的弥散。 使用i i i i i i i i i试剂盒抽 i抽提管中。 i抽提液。 i ii. ii微阵列探针合成： iiiii咎昴ii捎茫熬iiii微流体芯片 针序列信息来自于iii 间阻碍。 针的i值，使其杂交温度i一致趋于i》。 ii作为iii芯片的内源阳性 对照；探针的阴性对照除了针对i i i i i人工合成序列的单碱基错配探针， i i. i i i i i的标记 尾巴连接用于后续的荧光标记，以便在i i i杂交到芯片后放大信号。 记样品的转录表达水平接近，则杂交探针点呈现黄色。 片上过夜i i i i i i i i i i i i咏皇褂煤i