铁皮石斛多糖与甘露糖检测规程

铁皮石斛多糖与甘露糖检测规程 铁皮石斛 Tiepishihu DENDROBII OFFICMALIS CAULIS 本品为兰科植物铁皮石斛Dendrobium officinale Kimu-ra et Mlgo的干燥茎。11月 至翌年3月采收，除去杂质，剪去部分须根，边加热边扭成螺旋形或弹簧状，烘干；或切成 段，干燥或低温烘干，前者习称“铁皮枫斗”（耳环石斛）；后者习称“铁皮石斛”。 【性状】 铁皮枫斗 本品呈螺旋形或弹簧状.通常为2〜6个旋纹，茎拉直后长3. 5〜 8cm,直径0.2〜0.4cm。表面黄绿色或略带金黄色，有细纵皱纹，节明显，节上有时可见残 留的灰白色叶鞘；一端可见茎基部留下的短须根。质坚实，易折断，断面平坦，灰白色至灰 绿色，略角质状。气微，味淡，嚼之有黏性。 铁皮石斛本品呈圆柱形的段，长短不等。 【鉴别】（1）本品横切面表皮细胞1列，扁平，外壁及侧壁稍增厚、微木化，外被 黄色角质层，有的外层可见无色的薄壁细胞组成的叶鞘层。基本薄壁组织细胞多角形，大小 相似，其问散在多数维管束，略排成45圈，维管束外韧型，外围排列有厚壁的纤维束， 有的外侧小型薄壁细胞中含有硅质块。含草酸钙针晶束的黏液细胞多见于近表皮处。 （2）取本品粉末lg,加甲醇50ml,超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水15ml 使溶解，用石油醍（60〜90C）洗涤2次，每次20ml,弃去石油醍液，水液用乙酸乙酯洗涤2 次，每次20ml,弃去洗液，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml,合并正丁醇液， 蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取铁皮石斛对照药材lg,同法制成对 照药材溶液。照薄层色谱法（附录VIB）试验，吸取上述两种溶液各2〜5ul,分别点于同一 聚酰胺薄膜上，使成条状，以乙醇-丁酮-乙酰丙酮-水（15 15 5 85）为展开剂，展开，取 出，烘干，喷以三氯化铝试液，在105C烘约3分钟，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品 色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。 【检查】 甘露糖与葡萄糖峰面积比取葡萄糖对照品适量，精密称定，加水制成每 1ml含50pg的溶液，作为对照品溶液。精密吸取0. 4ml,按［含量测定］甘露糖项下方法依法 测定。供试品色谱中，甘露糖与葡萄糖的峰面积比应为2. 4〜8.0。 水分 不得过12. 0 （附录IX H第一法）o 总灰分 不得过6.0 （附录IX K） o 【浸出物】照醇溶性浸出物测定法（附录X A）项下的热浸法测定，用乙醇作溶剂， 不得少于6. 5 o 【含量测定】（一）多糖 1.1试剂 1. 1. 1 6苯酚先配置80苯酚80g苯酚（分析纯重蒸馅试剂）加20g水使之溶解，可置 冰箱中避光长期储存。 再配置5苯酚 取73ml80苯酚于容量瓶中，加水至48g （每 次测定均需现配），测定的时候就用5的苯酚来测 1. 1.2无水乙醇 1. 1. 3 80乙醇 1. 1. 4浓硫酸 1. 2设备 1.2. 1 10ml具塞试管，试验前检查塞子的密封性，不得有泄漏， 1.2.2 10至15ml离心管，使管口离离心液液面1cm以上，以防离心液甩出。 1.2.3紫外一可见分光光度计 1.2.4冰箱与冰块 1.2.5粉碎机，耐酸薄手套。 2. 2对照品溶液的制备 2.2. 1）取无水葡萄糖对照品0. 1g,精密称定，加水制成每1ml含100 ug的溶液，即得。 标准曲线的制备 精密量取对照品溶液0ml、0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0. 8ml, 分别置10ml具塞试管中（用前注意检查塞子的密封性），各加水补至l.Onil,精密加入5 苯酚溶液lml（临用配制），摇匀，再精密加硫酸5ml,摇匀，置沸水浴中加热20分钟，取出， 置冰浴中冷却5分钟，以相应试剂为空白，照紫外一可见分光光度法（附录VA）,在488nm 的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。20130723曲线 y0. 0088x0. 1128, y 为浓度.ug； x 为吸光度。 备注1.检测液位浓稠硫酸样液，腐蚀性很强倒皿时一定小心不要弄到手上，最好带上 合适的手套。2.检测液为浓稠硫酸样液，且总体积只有7ml （共2皿），连续检测多个样品 时，比色皿用水洗净，尽量甩干，再用少量待测液润洗，待测样品放在冰水浴中，测一个拿 一个。3.试剂添加顺序样品-5苯酚-浓硫酸，不可颠倒；样品加浓硫酸前要摇匀，加 之后也要摇匀，注意塞子密封，小心漏液。4,用过的浓硫酸中会有炭丝，若检测液中 黑炭丝的颜色有扩散的话，0D值会升高，需重处理复测。 2.2.2供试品溶液的制备 鲜茎100g以上，剪成2-3mm段，105C鼓风烘干，过40目筛分 别装入样品袋（鲜茎少的话，烘干后用锤子锤碎）称重，按筛上下重量比例取本品共约 0.3g,精密称定，加水200mL加热回流2小时，放冷，转移至250ml量瓶中，用少量水分 次洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加水至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml,置15ml 离心管中，精密加入无水乙醇10ml,摇匀，冷藏1小时，取出，离心（转速为每分钟4000 转）20分钟，弃去上清液（必要时滤过，观察上清液是否有沉淀，若有再离心或过滤），沉淀 加80乙醇洗涤2次，每次8mL离心（转速为每分钟4000转）20分钟，弃去上清液，沉淀 加60-80度热水溶解，转移至25nil量瓶中，放冷，加水至刻度，摇匀，即得。 测定法 精密量取供试品溶液Ml,置10ml具塞试管中，照标准曲线制备项下的方法, 自“精密加入5苯酚溶液1ml”起，依法测定吸光度A,从标准曲线上读出供试品溶液中 无水葡萄糖的量，计算，即得。多糖含量 A-0. 1124 /0. 0088*250*25/ 2*m* 1000000 *100 其中A-0. 1124 /0. 0088 为检测液浓度 ug, 250*25/ 2*m样品稀释倍数，1000000 为单位换算系数lg1000000ugo 本品按干燥品计算，含铁皮石斛多糖以无水葡萄糖C6H12O6计，不得少于25.0。 二甘露糖 照高效液相色谱法附录VI B测定。 2. 1色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腊-0. 02mol / L 的乙酸铉溶液20 80为流动相；检测波长为250nm。理论板数按甘露糖峰计算应不低于。 t000o 2. 2试剂 2. 2. 1盐酸氨基葡萄糖内标溶液12mg/ml 2. 2. 2 PMP1-苯基-3-甲基-5-毗U坐d林酮甲醇溶液0. 5mol/L 2. 2. 3 盐酸溶液 0. 3mol / L, 3mol/L 2. 2.4 氢氧化钠溶液 0. 3mol / L, 3mol/L 2. 3校正因子测定 取盐酸氨基葡萄糖适量，精密称定，加水制成每1ml含12mg的溶液， 作为内标溶液。另取甘露糖对照品约10mg,精密称定，置100ml量瓶中，精密加入内标溶 液1ml,加