同型对照

同型比照 同型比照的主要目的是确定一抗的结合是特异性的，而不是非特异性的Fc受体或与其他蛋白的相互作用。还可以用来竞争性的结合抗体，与功能阻断抗体发挥同样的功能。 同型比照要与一抗的来源，Ig分型和标记完全一样。 同型比照（Isotype Control）运用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫球蛋白及亚型的免疫球蛋白，用于消退由于抗体非特异性结合到细胞表面而产生的 背景染色。假如一抗是多抗，可以用an normal serum（与一抗相同的正常血清） （must be the same species as primary antibody）。This control is easy to achieve and can be used routinely in immunohistochemical staining.这个可以询问试剂商。同型比照为免疫荧光标记中的阴性比照。由于荧光标记单抗的组来源不同，应选用相同来源的未标记单抗作为同型比照来 调整背景染色。举个例子比如检测一抗为单抗的mouse anti rat CD11b，clone OX-42 purified IgG，那么它的isotype 是mouse IgG2a， 所以可以用purified（纯化的） mouse IgG2a来做OX-42的同型比照（Isotype Control）。一般的的生物技术公司和国内的代理都有出售。 同型比照是指与MoAb相同的、未免疫小鼠的免疫球蛋白亚类，若运用干脆免疫荧光染色法，同型比照也应标记荧光色素，如IgG1 FITC、IgG2ａ、PE等。主要考虑了细胞的自发荧光、FC受体介导的抗体结合和非特异性抗体结合等影响因素。此外，同型比照与MoAb所标记的荧光 色素、浓度、FP比值（标记的荧光色素与免疫球蛋白分子的比值）应当相同为最佳，这对精确设定阴性与阳性细胞的界标有重要意义，切忌运用与MoAb不相 匹配的同型比照，最好为同一试验室、采纳相同工艺或方法制备（犹如一品牌）的产品。 流式同型比照 一般选择与一抗的成分完全相同种属来源、相同亚型和亚链、相同荧光标记的抗体，比如抗人的CD56 APC标记的抗体，成份是Mouse IgG1,；kappa；。那么它的同型比照应当是APC标记的Mouse IgG1,；kappa；。留意同型比照的成份跟它的名称是相同的.假如是抗体的组合形式是纯化的一抗＋荧光标记的二抗，那么应当选择一抗的同型比照。比如CDw125的纯化抗体，成分是MouseIgG1,；kappa；。它的同型比照是纯化的Mouse IgG1,；kappa；。它的二抗PE标记的抗小鼠IgG1。那么染色方式如下样本管纯化的CDw25＋PE标记的抗Mouse IgG1＋样本同型比照管纯化的同型比照＋PE标记的抗MouseIgG1＋样本假如没有找到适合的同型比照，在保持来源相同、荧光标记相同、免疫球蛋白类别相同条件下，那么优先选择的依次应当是亚链不同--亚型不同--相同类别。比如，某种的抗体的来源是Mouse IgG2а,；kappa；。假如在同型比照表里面找到不到完全相同的同型比照，那么优先选择相同荧光标记的Mouse IgG2а为同型比照。假如也没有找到Mouse IgG2а，那么优先选择相同荧光标记的Mouse IgG2b作为同型比照。假如最终还是没有找到Mouse IgG2b，那么选者相同荧光标记的Mouse IgG2作为同型比照。 由于抗体与细胞间存在非特异性结合（如电荷间互吸等），流式抗体与细胞结合时有特异性结合部分和非特异结合部分,流式同型比照试剂 用于消退非特异结合所至非特异染色，严格来说，同型比照应当是同一抗原抗体制备的生产厂家，同一种属动物来源，同一种免疫球蛋白（包括亚型），同一荧光标记，作用类似调零（一般阳性率限制在12内）。特殊是多标调荧光补偿时，做为参考。 荧光素干脆标记一抗FITC标记为例 兔抗人的CD34/ FITC标记的抗体荧光素干脆标记一抗,抗体动物种属来源Rabbit IgG 抗体,它的同型比照应当是FITC标记的Rabbit IgG（亲和纯化IgG）。留意同型比照的成份跟它的名称是相同的。 运用标记一抗Rabbit Anti-CD34/FITC 荧光素标记兔抗人CD34抗体IgG 同型比照 Rabbit IgG/FITC 荧光素标记兔IgG 间接免疫荧光检测PE标记为例 假如采纳间接免疫荧光检测一抗荧光PE标记的二抗，抗体动物种属来源为小鼠抗人的CD4抗体羊抗小鼠IgG/PE标记的二抗。 它的同型比照应当是亲和纯化小鼠IgG羊抗小鼠IgG/PE标记的二抗。 Mouse Anti-Human CD4 Monoclonal Antibody 小鼠抗人CD4抗体 同型比照 Mouse IgG Goat Anti-mouse IgG/PE 纯化小鼠IgG 羊抗小鼠IgG/PE标记的二抗。 设同型比照的目的 一、为什么要用同型比照 同 型比照是运用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫球蛋白及亚型的免疫球蛋白，用于消退由于抗体非特异性与细胞结合而产生的背景染色。同型 比照是真正意思上的阴性比照，它不但可以用来设定流式细胞仪的电压，而且还可以帮忙省去昂贵与繁琐的重组细胞因子竞争封闭步骤。 在流式细胞仪上样前，染色方式如下样本管一抗＋样本，同型比照管同型比照＋样本 二、如何选择同型比照 1一般选择与一抗的成分完全相同种属来源、相同亚型和亚链、相同荧光标记的抗体，比如抗人的CD56 FITC标记的抗体，成份是MouseIgG1,kappa;。那么它的同型比照应当是FITC标记的MouseIgG1,kappa;。留意同型比照的成份跟它的名称是相同的. 2假如是抗体的组合形式是纯化的一抗＋荧光标记的二抗，那么应当选择一抗的同型比照。比如CD86的纯化抗体，成分是MouseIgG1,kappa;。它的同型比照是纯化的Mouse IgG1,kappa;。它的二抗PE标记的抗小鼠IgG1,。那么染色方式如下样本管纯化的CD86＋PE标记的抗Mouse IgG1二抗＋样本,同型比照管纯化的同型比照＋PE标记的抗MouseIgG1二抗 ＋样本. 3假如没有找到适合的同型比照，在保持来源相同、荧光标记相同、免疫球蛋白类别相同条件下，那么优先选择的依次应当是亚链不同－－亚型不同－－相同类别。比如，某种的抗体的来源是Mouse IgG2а,kappa;。假如在同型比照表里面找到不到完全相同的同型比照，那么优先选择相同荧光标记Mouse IgG2а为同型比照。假如也没有找到Mouse IgG2а，那么优先选择相同荧光标记的Mouse IgG2b作为同型比照。假如最终还是没有找到Mouse IgG2b，那么选者相同荧光标记的Mouse IgG2作为同型比照。 3、哪些客户须要运用同型比照 A 对流式不是特别熟识的客户。 B 做胞内流式客户，比如胞内细胞因子、趋化因子和信号蛋白等。 C 运用不常见的标记或者特异性不高的标记的客户