化妆品微生物检验教学文案

一、总一、总则则 General PrincipleGeneral Principle 1 1范围范围 本规范规定了化妆品微生物学检验总则。 本规范适用于化妆品样品的采集、保存、供检样品制备。 2 2仪器和设备仪器和设备 2.1 天平。 2.2 高压灭菌器。 2.3 振荡器。 2.4 三角瓶。 2.5 玻璃珠。 2.6 玻璃棒。 2.7 刻度吸管。 2.8 研钵。 2.9 均质器。 2.10 恒温水浴箱。 2.11 采样用具：不锈钢勺，剪刀，开罐器等。 3 3培养基和试剂培养基和试剂 3.1 生理盐水 成分：氯化钠 蒸馏水加至 3.2SCDLP 液体培养基 成分：酪蛋白胨 大豆蛋白胨 氯化钠 磷酸氢二钾 葡萄糖 卵磷脂 吐温 80 蒸馏水 17g 3g 5g 2.5g 2.5g 1g 7g 1000mL 8.5g 1000 mL 溶解后，分装到加玻璃珠的三角瓶内，每瓶90mL，103.43kPa(15 lb)20min 高压灭菌。 制法：先将卵磷脂在少量蒸馏水中加温溶解后，再与其它成分混合，加热溶解，调pH 为 7.2～7.3，分装，103.43kPa(15lb)20min高压灭菌。注意振荡，使沉淀于底层的吐温80 充分混 合，冷却至 25℃左右使用。 注：如无酪蛋白胨和大豆蛋白胨，也可用多胨代替。 3.3灭菌液体石蜡。 3.4灭菌吐温 80。 4 4样品的采集及注意事项样品的采集及注意事项 4.1所采集的样品，应具有代表性，一般视每批化妆品数量大小，随机抽取相应数量的包装 单位。检验时，应分别从两个包装单位以上的样品中共取10g 或 10mL。包装量小于20g 的样 品，采样量应适量增加，其总量应大于16g。 4.2供检验样品，应严格保持原有的包装状态，进口产品应为市售包装。容器不应有破裂， 在检验前不得打开，防止样品被污染。 4.3接到样品后，应立即登记，编写检验序号，并按检验要求尽快检验。如不能及时检验， 样品应放在室温阴凉干燥处，不要冷藏或冷冻。 4.4若只有一份样品而同时需做多种分析，如微生物、毒理、化学等，应先做微生物检验， 再将剩余样品做其它分析。 4.5在检验过程中，从打开包装到全部检验操作结束，均须防止微生物的再污染和扩散，所 用采样用具、器皿及材料均应事先灭菌，全部操作应在无菌室内进行，或在相应条件下，按 无菌操作规定进行。 5 5供检样品的制备供检样品的制备 5.1 液体样品 5.1.1水溶性的液体样品，量取10mL 加到 90mL 灭菌生理盐水中，混匀后，制成1:10 检液。 5.1.2油性液体样品，取样品 10mL，先加 5mL 灭菌液体石蜡混匀，再加 10mL 灭菌的吐温 80，在 40℃～44℃水浴中振荡混合 10min，加入灭菌的生理盐水 75mL(在 40℃～44℃水浴中 预温)，在 40℃～44℃水浴中乳化，制成 1:10 的悬液。 5.2膏、霜、乳剂半固体状样品 5.2.1 亲水性的样品，称取 10g，加到装有玻璃珠及 90mL 灭菌生理盐水的三角瓶中，充分振 荡混匀，静置 15min。取其上清液作为 1:10 的检液。 5.2.2疏水性样品，称取10g，放到灭菌的研钵中，加10mL 灭菌液体石蜡，研磨成粘稠状， 再加入 10mL 灭菌吐温 80，研磨待溶解后，加 70mL 灭菌生理盐水，在 40℃～44℃水浴中充 分混合，制成 1:10 检液。 5.3固体样品，称取10g，加到90mL 灭菌生理盐水中，充分振荡混匀，使其分散混悬，静置 后，取上清液作为 1:10 的检液。 如有均质器，上述水溶性膏、霜、粉剂等，可称10g 样品加入 90mL 灭菌生理盐水，均质 1min～2min；疏水性膏、霜及眉笔、口红等，称10g 样品，加 10mL 灭菌液体石蜡，10mL 灭 菌吐温 80，70mL 灭菌生理盐水，均质 3min～5min。 二、菌落总数二、菌落总数 Aerobic Bacterial CountAerobic Bacterial Count 1 1范围范围 本规范规定了化妆品中菌落总数的检验方法。 本规范适用于化妆品菌落总数的测定。 2 2定义定义 本规范采用下列定义 菌落总数(aerobic bacterial count)是指化妆品检样经过处理，在一定条件下培养后(如培养 基成分、培养温度、培养时间、pH 值、需氧性质等)，1g(1mL)检样中所含菌落的总数。所得 结果只包括一群本方法规定的条件下生长的嗜中温的需氧性菌落总数。 测定菌落总数便于判明样品被细菌污染的程度，是对样品进行卫生学总评价的综合依据。 3 3仪器和设备仪器和设备 3.1三角瓶。 3.2量筒。 3.3pH 计或精密 pH 试纸。 3.4高压灭茵器。 3.5试管。 3.6平皿： 直径 9cm。 3.7刻度吸管： 10mL、2mL、1mL。 3.8酒精灯。 3.9恒温培养箱。 3.10放大镜。 4 4 培养基和试剂培养基和试剂 4.1生理盐水：见总则中3.1。 4.2卵磷脂、吐温 80—营养琼脂培养基 4.2.1成分：蛋白胨 牛肉膏 氯化钠 琼脂 卵磷脂 吐温 80 蒸馏水 20g 3g 5g 15g 1g 7g 1000mL 4.2.2制法：先将卵磷脂加到少量蒸馏水中，加热溶解，加入吐温 80，将其他成分(除琼脂外) 加到其余的蒸馏水中，溶解。加入已溶解的卵磷脂、吐温80，混匀，调pH 值为 7.1～7.4，加 入琼脂，103.43kPa(15 lb)20min高压灭菌，储存于冷暗处备用。 4.30.5%氯化三苯四氮唑(2,3,5-triphenyl terazolium chloride,TTC) 成分： TTC0.5g 蒸馏水100mL 溶解后过滤，103.43kPa(15 lb)20min高压灭菌，装于棕色试剂瓶，置4℃冰箱备用。 5 5操作步骤操作步骤 5.1用灭菌吸管吸取 1:10 稀释的检液 2mL，分别注入到两个灭菌平皿内，每皿 1mL。另取 1mL 注入到 9mL 灭菌生理盐水试管中(注意勿使吸管接触液面)，更换一支吸管，并充分混匀， 制成 1:100 检液。吸取 2mL，分别注入到两个灭菌平皿内，每皿 1mL。如样品含菌量高，还 可再稀释成 1:1000，1:10000，……等，每种稀释度应换1 支吸管。 5.2将融化并冷至45℃～50℃的卵磷脂吐温80 营养琼脂培养基倾注到平皿内， 每皿约 15mL， 随即转动平皿，使样品与培养基充分混合均匀，待琼脂凝固后，翻转平皿，置 37℃培养箱内 培养 48h。另取一个不加样品的灭菌空平皿，加入约 15mL 卵磷脂吐温 80 营养琼脂培养基， 待琼脂凝固后，翻转平皿，置37℃培养箱内培养 48h，为空白对照。 5.3为便于区别化妆品中的颗粒与菌落，可在每100mL 卵磷脂吐温 80 营养琼脂中加入 1mL0.5%的 TTC 溶液，如有细菌存在，培养后菌落呈红色，而化妆品的颗粒颜色无变化。 6 6菌落计数方法菌落计数方法 先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大 5～10 倍的放大镜检查，以防遗漏。记下各 平皿的菌落数后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。若平皿中有连成片状的菌落或 花点样菌落蔓延生长时，该平皿不