ABO血型鉴定的方法步骤与注意事项

ABO 血型鉴定的方法步骤与注意事项 一. 原理 根据红细胞上有或无 A 抗原或 B 抗原，将血型分为 A 型、B 型、 AB 型及 O 型 4 种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴 定 ABC 血 型。所谓正定型，是用已知抗一 A 和抗一 B 分型血清来测定 红细胞上有无相 应的 A 抗原或 B 抗原；所谓反定型，是用已知 A 细胞 和 B 细胞来测定血清中 有无相应的抗一 A 或抗一 B。 二. 试剂和材料 1. 抗一 A（B 型血）、抗一 B（A 型血）及抗一 A 十 B（O 型血）分型血清 （制备方法见本节附注） 2. 5%A B及 O 型试剂红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注； 3. 受检者血清； 4. 受检者 5%红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注。 三. 方法 1 .试管法 （1）取洁净小试管 3 支，分别标明抗一 A、抗一 B 和抗一 A 十 B,用 滴管 分别加抗一A抗一 B 和抗一 A 十 Bo 分型血清各 I 滴于试管底部， 再以滴管 分别加入受检者 5%红细胞盐水悬液 1 滴，混和。 （2）另取洁净小试管 3 支，分别标明 A、B 和 O 细胞。用滴管分别加 入 受检者血清 I 滴于试管底部，再分别以滴管加入A B 和 O 型 5% 试剂红细胞 悬液 I 滴，混和。 （3）立即以 1000r ／min 离心 1mino (4)将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以内眼观察有 无凝集 (或溶血)现象。如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再 以低倍镜检 查。 (5)观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于 B 亚型、类 B 或 cisAB 的发现。 (6)凝集强度判断标准 凝集强度 4+4+ 3+3+ 2+2+ 1 +1 + + + - - 判断标准 红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。 红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。 红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞 镜下可见数个红细胞凝集在 起，周围有很多游离红细胞 混合凝集外观(mixed field) 是指镜下可见少数红细胞凝 MFMF 集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。 - - A、 表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。 2.玻片法 (1) 取清洁玻片 1 张(或白瓷板 1 块)，用蜡笔划成方格，标明抗 -A、抗-B 和抗-A 十 B,分别用滴管滴加抗-A、抗-B 和抗-A 十 B 分型 血清 I 滴 于标明的方格内，再各加受检者 2%红细胞悬液 1 滴，混和。 (2)另取洁净玻片一张(或白瓷板 1 块)，用蜡笔划成方格，标明 A 细胞、 B 细胞和 0 细胞，用滴管各加受检者血清 1 滴，再分别用滴管 滴加 A、B 和 O 型试剂红细胞悬液 1 滴 （3）将玻片（或白瓷板）不断轻轻转动，使血清与细胞充分混匀，连 续 约 15min,以肉眼观察有无凝集（或溶血）反应。如以玻片作试验时, 也可用 低倍镜观察结果。 四. ［结果判定］ ABO 血型正反定型结果 分型血清+受检者红细胞 抗-A + - - + 抗-B - + - + 抗-AB + + - + 受检者血清+试剂红细胞 受检者血型 A 细胞 - + + - B 细胞 + - + - O 细胞 - - - - A B O AB 注；“十”为凝集；“-”为不凝集。 五•附注及注意事项 1. 分型血清质量性能符合要求，用毕后应放置冰箱保存，以免细 菌污 染。 2. 试剂红细胞以 3 个健康者同型新鲜红细胞混和，用生理盐水洗 涤 1 次，以除却存在于血清中的抗体及可溶性抗原。 3. 试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。 4. 操作方法应按规定，一般应先加血清，然后再加红细胞悬液， 以便容 易核实是否漏加血清 5.按理 IgM 抗-A 和抗-B 与相应红细胞的反应温度以4C为最强，但为了 防止冷凝集现象的干扰，一般仍在室温 （20 —24C）内进行试 验，37 C 可 使反应减弱。 6.离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性 或假阴 性结果。 7.观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排 列的区 别。 8.判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误。正反定型结果不一 致的原 因 六. 常见有技术性问题或红细胞和血清本身的问题 1.分型血清效价太低、亲和力不强。如抗— A 血清效价不高，可 将 A 亚 型误定为 O 型，AB 型误定为 B 型。 2.红细胞悬液过浓或过淡，抗原抗体比例不适当，使反应不明显， 误判 为阴性反应。 3.受检者红细胞上抗原位点过少 （如亚型）或抗原性减弱 （见于白血 病或恶性肿瘤：以及类 B 或 cisAB 等。 4.受检者血清中蛋白紊乱 （ 高球蛋白血症 ） ，或实验时温度过高， 常引起红细胞呈缗钱状排列。 5.受检者血清中缺乏应有的抗-A 及或抗一 B 抗体，如丙种球蛋白 缺乏 症。 6.各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集。部分溶血时，可 溶性血 型物质中和了相应的抗体 . 7．由细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不 符的原 因。 8．血清中有意外抗体，如自身抗 -I ，常引起干扰。 9．老年人血清中抗体水平大幅度下降正反定型结果不一致的解决 办法如 发现 ABO 正反定型结果不一致，先要重复作试验 1 次。严格执 行操作规程， 使用质量合格的试剂以及细心观察和解释试验结果， 就 可解决明显的问 题，对一些疑难问题月必须进一步研究。 [ 检查步骤 ] 1．另从受检者采取 l 份新鲜血液标本这样可以纠正因污染或搞错 样本造 成的不符合。 2 .将红细胞洗涤数次，配成 5%盐水细胞悬液，用抗一 A、抗一 B 抗一 Al，抗一 A 十 B 及抗 H 做试验可以得到其它有用的信息。 3.对受检红细胞作直接抗球蛋白试验，如结果呈阳性，表示红细 胞已被 抗体致敏。 4 .用 Al、Az、B、O 红细胞及自身红细胞检查受检血清。如果怀疑 是抗一 I，用 O 型（或 ABO 相合的）脐血红细胞检查。 5. 如果试验结果未见凝集，应将细胞及血清试验至少在室温和 4C 放置 30min,用显微镜检查核实。 6. 如疑为 A 抗原或 B 抗原减弱，则可将受检红细胞与抗— A 或抗 —B 血清作吸收及放散试验以及受检者唾液作 A B、H 血型物质测定。 后者只对 80% HAB 分泌型的人有用。 7.如试验结果红细胞呈绢钱状排列,加等渗盐水 l 滴,混和,往 往可使绢 钱现象消失。 应注意不应先加盐水 l 滴于受检者血清中而后 和红细胞作试 验，以免使血清中抗体被稀释。 8 如受检者为 A 型血而疑为有类 B 抗原时，可用下列方法进行鉴 别： (1)观察细胞与抗一 A 及抗一 B 的凝集强度，与抗一 A 的反应要比与 抗一 B 的反应强。这种区别用玻片法作试验更为明显。 (2)用受检者红细胞与自身血清作试验，血清中的抗— B 不凝集自 身红细 胞上的类 B 抗原。 (3)检查唾液中是否有 A、B 物质，如果是分泌型，可检出 A 物质而 无 B 物质。 (4)核对患者的诊断，类 B 抗原的形成与结肠癌、直肠癌、革兰阴 性杆菌 感染有关。 9．如发现