魏氏梭菌α毒素基因的克隆表达及间接ELISA方法的初步研究的开题报告

精品文档---下载后可任意编辑 魏氏梭菌α毒素基因的克隆表达及间接ELISA方法的初步讨论的开题报告 题目 魏氏梭菌α毒素基因的克隆表达及间接ELISA方法的初步讨论 摘要 魏氏梭菌 C. perfringens 是一种致病菌，常常与肠炎、胆管炎、皮肤感染等疾病相关联。α毒素是魏氏梭菌最主要的外毒素之一，能够导致组织坏死和其他病理变化。因此，讨论该毒素的表达和检测方法对于疾病的预防和治疗具有重要的意义。 本文旨在将魏氏梭菌α毒素基因进行克隆表达，并且对间接酶联免疫吸附检测ELISA方法进行初步讨论，以此来检测魏氏梭菌α毒素的存在。 通过PCR扩增魏氏梭菌α毒素基因，将其克隆到pET32a载体中，并在E. coli BL21DE3菌株中表达。利用SDS-PAGE和Western blotting鉴定了表达和纯化的蛋白质。 建立了一种间接ELISA方法，以检测魏氏梭菌α毒素。在这种方法中，我们将兔子抗魏氏梭菌α毒素抗体作为一次抗体，然后利用HRP偶联的羊抗兔IgG作为二次抗体。我们发现该方法的灵敏度为0.1 ng/ml。 最后，我们对该方法进行了初步的实际检测。在71份不同来源的临床标本中，该检测方法检测到17份阳性样本，结果与传统的PCR方法检测结果基本一致。因此，我们认为这种方法可以作为一种有效的检测魏氏梭菌α毒素的方法，并有望在临床上得到广泛应用。 关键词 魏氏梭菌α毒素，基因克隆表达，间接ELISA方法，检测方法