APRIL阻断剂BCMA-Fc的表达、纯化及活性研究开题报告

精品文档---下载后可任意编辑 APRIL阻断剂BCMA-Fc的表达、纯化及活性讨论开题报告 一、讨论背景 随着免疫治疗技术的不断进展，作为具有重要作用的细胞因子，信号因子及受体的分子工程技术也得到了广泛应用。其中，B细胞成熟抗原（BCMA）是B细胞病毒转录激活因子（B-cell maturation antigen，BCMA）和细胞因子类提取物a proliferation-inducing ligand APRIL仅在B细胞生发能活化，而在其他类型的细胞上则表达不足或者完全不表达，因此，BCMA和APRIL已被证明是一对非常理想的靶点以治疗多发性骨髓瘤（MM）等B细胞疾病。 目前针对BCMA和APRIL制备的阻断剂包括单克隆抗体、Fc融合蛋白、CAR-T等，而APRIL-Fc融合蛋白能有效阻断BCMA/APRIL通路，并且在Pre-B-ALL细胞、浆细胞瘤细胞以及慢性淋巴细胞白血病细胞中证实了细胞毒性。因此，本讨论计划通过分子克隆和表达、蛋白纯化以及活性检测等方法，制备April-Fc融合蛋白，并对其进行活性讨论，为深化讨论APRI-Fc的应用提供基础性实验支持。 二、讨论方法 1. 分子克隆根据April-Fc重组蛋白基因序列设计一对引物，进行PCR扩增，将扩增产物进行酶切，将其连接到相应的载体上，以便于后续的表达。 2. 细胞培育及表达将所得到的重组载体转染到CHO细胞中，筛选表达April-Fc的克隆细胞，并进行小规模的表达和纯化。 3. 蛋白纯化将小规模表达的细胞培育液经离心取下细胞上清液，利用蛋白A/G纯化柱将目标蛋白进行纯化。 4. 蛋白鉴定将纯化的April-Fc融合蛋白进行SDS-PAGE电泳分析、Western Blot检测、质谱鉴定以及内毒素检测等方法进行蛋白质鉴定。 5. 活性检测使用WST-1细胞增殖实验、流式细胞术等方法对April-Fc融合蛋白的活性进行检测。 三、估计结果 通过上述方法制备出高质量的April-Fc融合蛋白，并对其进行了活性检测。根据检测结果，我们将对April-Fc融合蛋白的活性进行评价，并且探究其在临床前讨论中的潜在应用。 四、讨论意义 该讨论结果有助于深化探究April-Fc阻断BCMA/APRIL通路的分子机制，为该阻断剂的应用提供实验基础支持，对深化开发BCMA阻断剂等治疗方式及提高生存率有积极作用帮助。