4例非综合征性唇腭裂患者microRNA的表达分析的开题报告

精品文档---下载后可任意编辑 4例非综合征性唇腭裂患者microRNA的表达分析的开题报告 一、讨论背景 唇腭裂（cleft lip and palate，CL/P）是一种常见的口颌面畸形，其发病率在不同人群中有所不同。综合征性唇腭裂（syndromic cleft lip and palate，S-CL/P）占10左右，而非综合征性唇腭裂（non-syndromic cleft lip and palate，NS-CL/P）则占90左右，是一种多基因遗传疾病。 在唇腭裂的发生和进展中，microRNA miRNA被认为是一个重要的调控因子。miRNA是一种长度约22个核苷酸的小RNA，可以靶向调控多个基因表达，从而发挥广泛的生物学作用。近年来，越来越多的讨论表明，miRNA在CL/P的发生和进展中具有重要的作用。 二、讨论目的 本讨论旨在分析4例NS-CL/P患者和4例正常对比对象miRNA的表达情况，筛选出与NS-CL/P相关的miRNA，并初步探讨其功能。 三、讨论内容和方法 讨论内容 1.收集4例NS-CL/P患者和4例正常对比对象的血液样本，提取总RNA。 2.通过高通量测序技术分析miRNA的表达情况，并对测序结果进行分析。 3.运用生物信息学方法对筛选出的差异表达miRNA进行功能注释和通路分析。 4.对筛选出的miRNA进行定量PCR验证。 讨论方法 1.患者招募从相应医院中选择4例NS-CL/P患者和4例正常对比对象进行讨论。 2.分离RNA采纳Trizol方法提取血液样本中的总RNA。 3.构建文库通过TruSeq Small RNA Sample Prep Kit（Illumina）对提取的总RNA进行文库构建。 4.高通量测序使用Illumina HiSeq 2500平台进行高通量测序。 5.分析差异表达miRNA使用EdgeR进行miRNA差异表达分析。 6.功能注释和通路分析使用DIANA-miRPath v3.0对筛选出的差异表达miRNA进行通路分析和功能注释。 7.定量PCR验证使用SYBR Green qPCR Master Mix Thermo Fisher Scientific对筛选出的miRNA进行定量PCR验证。 四、讨论意义 本讨论为进一步讨论NS-CL/P的遗传机制提供了重要的理论依据和实验数据。同时，筛选出的差异表达miRNA可供临床诊断和治疗提供新的靶点和方法。