4株NDV流行株的全基因测序分析及鸭源NDV-HN蛋白的原核表达的开题报告

精品文档---下载后可任意编辑 4株NDV流行株的全基因测序分析及鸭源NDV HN蛋白的原核表达的开题报告 讨论背景 新城疫是一种由新城疫病毒（Newcastle disease virus, NDV）引起的高传染性疾病，对家禽养殖业造成重大损失。目前，NDV存在多种血清型和亚型，并且不同血清型和亚型的NDV流行株在不同地区和种群中广泛存在。因此，了解NDV的分子进化和生物学特性对新城疫的早期预防和控制具有重要意义。 讨论内容与方法 本项目的讨论内容包括4株NDV流行株的全基因测序分析和鸭源NDV HN蛋白的原核表达。具体方法如下 一、4株NDV流行株的全基因测序分析 1.提取NDV RNA，并采纳逆转录PCR方法合成cDNA。 2.将cDNA片段构建成文库，进行高通量测序。 3.对高通量测序结果进行拼接、比对和注释分析，获得NDV流行株的全基因序列。 4.利用生物信息学方法对NDV流行株的基因序列进行系统进化和遗传变异分析。 二、鸭源NDV HN蛋白的原核表达 1.采纳PCR方法克隆NDV HN基因，并将其构建到原核表达载体中。 2.将重组质粒转化到大肠杆菌DH5α中，筛选阳性菌落并进行序列鉴定。 3.利用IPTG诱导大肠杆菌DH5α表达重组NDV HN蛋白。 4.利用SDS-PAGE和Western blotting方法检测重组蛋白的表达情况和免疫原性。 讨论意义与预期结果 本项目的讨论意义在于深化了解NDV的分子进化和基因变异模式，并为NDV的抗病毒疫苗研发提供理论依据。同时，本项目预期实现的结果包括获得4株NDV流行株的全基因序列，分析NDV的系统进化和遗传变异情况，并获得鸭源NDV HN蛋白的原核表达及免疫原性检测结果。