细胞培养技术问题整理题库

一．名词解释一．名词解释 1.细胞培养细胞培养用酶消化法讲组织碎块分离成单个细胞，用培养基制成细胞悬液，在体外适 宜的条件下，使细胞生长繁殖，并保留其一定的结构和功能特性。 2.BSSBSS 溶液溶液平衡盐溶液，是人工合成培养基的基础成分，也常用来洗涤组织细胞，其主 要成分是无机盐和葡萄糖，无机盐构成细胞的生命成分，维持细胞渗透压既其生存环境 的稳定。葡萄糖供给细胞生存所需的能量。其中含少量酚红作为溶液酸碱度的指示剂。 Hank’ s 液是常用的 BSS 液。 3.原代细胞培养原代细胞培养又称为初代细胞培养，从机体去的材料（细胞、组织或器官），在培养 瓶内培养到第一次传代前。 4.传代培养或传代传代培养或传代细胞在培养器皿中生长一定时间后，被分开接种到新的培养器皿中。 5.组织块培养法组织块培养法将组织块剪切成小块，直接送入培养瓶（皿）中，贴附一段时间后，细 胞从组织块长出，最终形成单层细胞。 6.细胞系细胞系原代细胞首次传代成功后即可成为细胞系 7.细胞株细胞株通过筛选或克隆化，且有特殊性质或特异标记的细胞，这些特性在以后的培养 中必须存在。这些特性包括具有一定的标记染色体，对某种病毒的敏感性或抗性，以 及具有特殊的抗原性等。 8.接触抑制接触抑制当一个细胞被其他细胞阻挡而无去处时就停止移动，接触区域的细胞膜皱褶 样活动停止，这样保证了细胞不会重叠生长。 9.密度抑制密度抑制正常细胞生长汇合成单层时，细胞密度达到一定程度时，细胞即停止分裂的 现象。 10. 合成培养基合成培养基 （synthetic medium ）是通过顺序加入准确称量的高纯度化学试剂与蒸 馏水配制而成的，其所含的成分（包括微量元素在内）以及他们的量都是确切可 知的。合成培养基一般用于实验室中进行的营养、代谢、遗传、鉴定和生物测定 等定量要求较高的研究 11. 有丝分裂指数有丝分裂指数 mitotic index 一个细胞群体中正在进行有丝分裂的细胞的百分数。 12. 悬浮培养悬浮培养在流动的液体培养基中培养非贴壁的悬浮细胞或小细胞团的细胞或组织的培 养方法。细胞附着在微运载体上的培养也是一种悬浮培养。 二、细胞培养技术的优缺点 优点1.得到的是活细胞能长时间、直接观察、研究活细胞的形态结构、生命活动 2.可控制选择对象、性质、调节条件。 3. 应用广， 学科多 对象广。各种动物低等动物--高等动物--人类一种动物不 同年龄不同组织 正常或异常（肿瘤） 4.较经济花钱较少但可得到大量、同时、重复性好的生物学性状相似的实验对象 5. 不易污染环境 缺点1. 现人工无法完全模拟体内环境 a. 失去彼邻关系 b.失去神经体液的调节和细胞 相互间的影响 2. 细胞趋向单一化 3.失去原有组织结构和细胞形态 4.分化减弱或不显要正确认识体外培养细胞是一种特定条件下生长的细胞群体。 5. 某些类型细胞还很难培养 6.大规模培养难度大 三、体外细胞培养的方式及特点三、体外细胞培养的方式及特点 1、粘附型培养 附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。粘附是大多数有机体细 胞在体内外生存和生长发育的基本存在方式 2、 悬浮型培养 不必附着于固相支持物表面， 而在悬浮状态下即可生长的细胞。 来源 来 自血，脾或骨髓，尤以血中白细胞.癌肿细胞也可以.特点在悬浮中生长良好,细胞圆形， 单个或小细胞团 优点 生存空间大，提供数量大,传代方便不需消化,易于收获可获得 稳定状态.缺点观察不方便, 很多细胞不能悬浮生长尤以正常细胞 四、体外培养细胞的生长形态分类四、体外培养细胞的生长形态分类 主要 2 类 上皮样、成纤维细胞样 、其它不定型 上皮样细胞型。来源来源于外胚层，内胚层细胞 如皮肤及其衍生物, 消化道，乳腺， 肺泡, 上皮性肿瘤形态类似体内的上皮细胞扁平，不规则多角形，中有圆形核 易相连 成片相靠紧密相连 成薄层铺石状 成纤维细胞样细胞 。 培养中形态与成纤维细胞类似 来源中胚层间充质组织起源的组织 如真正的成纤维细胞 心肌，平滑肌，成骨细胞，血管内皮细胞形态似体内成纤维 细胞的形态 胞体梭形或不规则三角形 胞质向外伸出 23 个长短不等的突起中有卵圆形核 五、解释下列常用术语五、解释下列常用术语1.1.细胞系（细胞系（cellcelllineline）） 2.2.细胞株细胞株 3.3.原代培养原代培养 4.n4.n 传代传代 培培 养养 5.5.转染（转染（transfectiontransfection））6.lipofection6.lipofection 1.细胞系（cell line）原代培养物首次传代后，就可以称细胞系。不能或有限传代下去称有 限细胞系。能连续传代的称连续细胞系。 2.细胞株某类细胞经传代克隆并保持了该类细胞理化特征的细胞群体。 3.原代培养直接取自生物体的组织细胞并进行培养。 4.传代培养将细胞从一个培养物内分散到另一个培养物的过程。 5.转染（transfection）将某个基因转移到培养细胞核内。 6.lipofection常用细胞转染剂（脂质体），它搭载基因（DNA）后形成复合物可转染到动 物细胞。 六、细胞培养的条件及设备六、细胞培养的条件及设备 a.细胞培养室 b.常用设备 1. 超净工作台；2. 纯水装置；3. 抽气泵；4. 消毒装置；5. 干燥装置；6. CO2 培养箱孵箱；7. 液氮生物容器；8. 冰箱；9.离心机 10. 天平 11. 显微镜 12. 过滤装置 13. 空调 14. 酸度计 15. 干燥器 七七. .、原代培养技术的过程、原代培养技术的过程 取材→漂洗→剪切→消化→计数→接种（具体可以看课本） 八八. .、传代培养技术过程、传代培养技术过程 传代培养技术 去旧换新液→消化→分装 九、每代细胞基本的生长过程九、每代细胞基本的生长过程 1. 游离期细胞接种后最初一段时间, 细胞在培养基中呈悬浮状, 胞体圆形. 2. 贴壁期细胞附着于支持物上 3. 潜伏期细胞活着但无分裂. 细胞株 624h原代 2496h 4. 指数增长期细胞增殖旺盛, 数量成倍增多, 最适合实验研究. 35d 以后来到. 5. 停止期衰退期细胞长满瓶壁, 有活力, 不增殖, 能存活一段时间. 如传代进入下 一循环. 十、细胞培养技术的应用 1、基本生长特点、活动及细胞周期 2、细胞遗传学 3、细胞内蛋白、酶及其它物质的定性、定量分析（细胞化学、免疫组化和荧光定量等） 4、分子生物学 a.DNA 分离、分析 b.基因导入 c.基因表达的原位检测 5、生物技术 a.疫苗的制备 b.细胞工程抗体 6、药物开发药理、毒力和药效试验 7、细胞分化 ,如干细胞研究 8、肿瘤学研究发生、发展、浸润、转移和转化等 9、细胞衰老、凋亡 2 2、乳鼠心肺组织块原代培养的方法、乳鼠心肺组织块原代培养的方法 1取材将乳鼠断髓用镊子夹尾，将鼠身浸入75酒精中旋转 3s取出后，置小 鼠于培养皿中 （已消毒） 固定小鼠于操作台