生物技术实训总结

微生物代谢产物制备与鉴定实训总结微生物代谢产物制备与鉴定实训总结 实训目的实训目的 1、了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常用的生理生化反应的测定方 法。 2、通过不同细菌对不同含碳、含氮化合物分解利用情况，了解细菌碳、氮代谢 类型的多样性。 3、了解细菌在培养基中的生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义。 4、学习各种接种技术。 实训时间实训时间 2015 年 12 月 14 日2015 年 12 月 21 日 实训项目实训项目 柠檬酸盐实验 糖发酵试验 吲哚实验 淀粉水解实验 硫化氢实验 甲基红实验 乙酰甲基甲醇实验 实验器材 实验原理实验原理 各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢 产物存在差别。 以此用生理生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其 代谢产物， 从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生理生化反应。 实验器材实验器材 1 菌种 大肠杆菌、普通变形杆菌、枯草杆菌、产气肠杆菌 2 培养基 淀粉培养基、蛋白胨培养基、葡萄糖蛋白胨水培养基、柠檬酸铵半固体培养 基、葡萄糖发酵管和乳糖发酵管各 3 支。 3 溶液和试剂 卢戈氏碘液、甲基红试剂、40 KOH 溶液、萘酚，乙醚和吲哚试剂 4 仪器和其他用品 接种针、接种环、涂布棒、酒精灯、试管、锥形瓶、烧杯、量筒、平皿 试剂及培养基配置试剂及培养基配置 （一）试剂 （1）V．P．试剂 1．5α-萘酚无水酒精溶液 α-萘酚 5g 、无水乙醇 100ml 2．40KOH 溶液 KOH 40g 、蒸馏水 100ml （2）甲基红试剂 甲基红 0.1g、95乙醇 760ml、蒸馏水 100ml （3）吲哚试剂 对二甲基氨基苯甲醇 8g、95乙醇 760ml、浓 HCL 160ml （二）培养基 （1）葡萄糖蛋白胨水培养基用于乙酰甲基甲醇（V.P）和甲基红（M.R）试 验 配方蛋白胨 5g、葡萄糖 5g、K2HPO4 2g、蒸馏水 1000ml，pH 7.2，115℃湿热 灭菌 20min （2）蛋白胨水培养基用于吲哚试验 配方蛋白胨 10g、NaCl 5g、蒸馏水 1000ml，pH 7.2-7.4，121℃湿热灭菌 20min （3）糖发酵培养基用于细菌糖发酵试验 配方蛋白胨 0.2g、NaCl 0.5g、K2HPO4 0.02g、水 100ml、溴麝香草酚蓝（1 水溶液）0.3ml、糖类 1g、蒸馏水 1000ml，115℃湿热灭菌 20min 制法分别称取蛋白胨和 NaCl 溶于热水中，调 pH 至 7.4，再加入溴麝香草酚蓝 （先用少量 95乙醇溶解后，再加水配成1水溶液），加入糖类（葡萄糖、蔗糖 等），分装试管，装量4-5cm 高，并倒放入一杜氏小管（管口向下，管内充满培 养液），灭菌时注意延长煮沸时间，尽量把冷空气排尽以使杜氏小管内不残存气 泡。 （4）淀粉培养基用于淀粉水解试验 配方 蛋白胨 10g、 NaCl 5g、 牛肉膏 5g、 可溶性淀粉 2g、 琼脂 20g、 蒸馏水 1000ml， 121℃湿热灭菌 20min （5）柠檬酸铁铵半固体培养基用于硫化氢生成试验 配方蛋白胨 20g、氯化钠 5g、柠檬酸铁铵 0.5g、硫代硫酸钠 0.5g、琼脂 5-8g、 蒸馏水 1000ml，pH 7.2，121℃湿热灭菌 20min （6）柠檬酸盐培养基 配方硫酸二氢铵 1g、磷酸氢二钾 1g、氯化钠 5g 硫酸镁 0.2g、柠檬酸钠 2g、 琼脂 15-20g、蒸馏水 1000ml、1溴麝香草酚蓝乙醇液 10ml 制法上述成分加热溶解后，调 pH6.8，加入指示剂，摇匀，用脱脂棉过滤，制 成后为黄绿色，分装试管，121℃灭菌 20min 后制成斜面。 实验一淀粉水解实验实验一淀粉水解实验 一、目的要求 1、检测细菌能否产生淀粉酶和利用淀粉的能力。 2、学习点接法接种。 二、实验原理 有些细菌具有合成淀粉酶的能力，可以分泌胞外淀粉酶 .淀粉酶可以使淀粉水解 为麦芽糖和葡萄糖,淀粉水解后遇碘不再变蓝色。 三、仪器和材料 1、活材料大肠杆菌,枯草杆菌 2、培养基淀粉培养基牛肉膏蛋白胨培养基加 0.2的可溶性淀粉。 3、试剂卢哥氏碘液。 4、实验用品平皿,接种环,酒精灯,试管,接种针等。 四、实验步骤 准备淀粉培养基平板将熔化后冷却至 50℃左右的淀粉培养基倒入无菌平皿中 , 待凝固后制成平板。 接种接种 用记号笔在平板底部划成两 部分,在每部分分别写上菌名,用接 种环取少量的待测菌,点接在培养 基表面的相对应部分的中心 ,其中 一个菌种应是枯草杆菌做对照菌。 培养培养 将接种后的平皿置于37℃恒 温箱培养 24h。 六、结论分析 淀粉在酸的催化作用下，能发生水解；淀粉的水解过程先生成分子量较小的糊 精淀粉不完全水解的产物， 糊精继续水解生成麦芽糖， 最终水解产物是葡萄糖。 培养基将细菌接种在平板上，置 37 度温箱中培养 24h，加革兰氏碘液于菌落 上，观察颜色变化，呈蓝色者为阴性，无蓝色为阳性。 实验二吲哚实验实验二吲哚实验 某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸而生成吲哚。吲哚与对二甲基氨苯甲醛结合， 形成玫瑰吲哚，此为红色化合物，其反应变化如下 一、目的要求 1. 学习鉴定细菌常用的生物化学试验原理和方法吲哚试验。 2. 巩固无菌操作技术，学习无菌操作接种技术； 二、基本原理 有些细菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸生成吲哚 靛基质。吲哚本身 没有颜色，不能直接看见，但当加入对二甲基氨基苯甲醛试剂时，该试剂与吲哚 作用，形成红色的玫瑰吲哚。 流程标记试管→接种→培养→观察→记录 三、实验步骤 （1）取蛋白胨水培养基试管四支，分别接种大肠 杆菌，自己分离的大肠杆菌，枯草杆菌，留一支 作空白对照， 并在试管上注明菌名和组别， 置37℃ 培养 24 小时。 （2）培养后取出，在培养液中先加入乙醚约 1 毫 升（使呈明显的乙醚层），充分振荡，使吲哚溶于乙醚中，静置片刻，使乙醚层 浮于培养基的上面，这时再沿管壁慢慢加入吲哚试剂 510 滴，观察有无红色出 现。有红色环出现者为阳性，黄色者为阴性。 四、实验分析 右边图片是根据网 络资料收集到的实 验结果，经过对比， 发现本组实验结果 比较成功。 最终得结论出有红 色环出现者为阳性， 黄色者为阴性。 实验三糖发酵试验实验三糖发酵试验 一、实验目的 1、了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的重要作用。 二、实验原理 绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源， 但是它们在分解糖的能力上有很大 的差异，有些细菌能分解某种糖并产酸（如乳酸、醋酸、丙酸等）和气体（如氢、 甲烷、二氧化碳等）；有些细菌只产酸不产气。例如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄 糖产酸并产气；伤寒杆菌能分解葡萄糖产酸不产气，不能分解乳糖；枯草芽孢杆 菌分解葡萄糖产酸产气， 不能分解乳糖， 普通变形杆菌能分解葡萄糖产酸、 产气， 但不能分解乳糖。 酸的产生可利用指示剂来断定。 在配制培养基时预先加入溴甲酚紫[Ph5.2 （黄色） -6.8（紫色）]，当发酵产酸时，可使培养基由紫色变为黄色。气体的产