交叉配血试验笔记

实验八实验八交叉配血试验交叉配血试验 交叉配血是将受血者的红细胞与血清分别同供血者的血清与红细 胞混合，观察有无凝集现象（见图 4-3-1-1）。输血时，一般主要考 虑供血者的红细胞不要被受血者的血清所凝集； 其次才考虑受血者的 红细胞不被供血者的血清所凝集。 前者叫交叉配血试验的主侧 （也叫 直接配血），后者叫交叉配血的次侧（也叫间接配血）。只有主侧和 次侧均无凝集，称为“配血相合”，才能进行输血；如果主侧凝集，称 为“配血不合”或“配血禁忌”，绝对不能输血；如果主侧不凝集，而次 侧凝集，可以认为“基本相合”，但输血要特别谨慎，不宜过快过多， 密切注视有无输血反应。 【实验目的】学习交叉配血的三种常用方法。 【实验对象】人体（学生自愿者）。 【实验器材和药品】 1．仪器 显微镜，离心机。2．器械 采血针，消毒注射器，双凹玻片， 小试管，竹签，棉球，腊笔。3．药品 标准 A 血清，标准 B 血清， 生理盐水，75％酒精，碘酒。 【实验步骤和观察指标】 图 4-3-1-1 交叉配血示意图 （一）红细胞悬浮液的配制红细胞悬浮液的配制 按需要型别， 取全血 1ml， 加等渗盐水 2 ～3ml， 充分 摇匀离心沉淀， 弃去上清液，然后再加生理盐水2 ～3ml 按上述方法洗涤，共三次， 取压积红细胞 5 滴，加新鲜等渗盐水 4 ml ，即成 5 ％红细胞悬液。 （二）交叉配血交叉配血基本原理见图 4-3-1-1 示。。 盐水介质交叉配血试验盐水介质交叉配血试验 实验原理实验原理 天然 IGM 类血型抗体与对应的红细胞抗原在室温下盐水介质中 发生凝集现象。可以检查供、受者血清中是否存在破坏对方RBC 的 IgM 抗体（ABO 血型中抗 A 抗 B 抗体以 IgM 抗体为主）。 实验步骤实验步骤 取二试管，分别注明“主”、“次”字样，主侧滴入供血者红细胞悬 液一滴和受血者血清一滴； 次则滴入受血者红细胞悬液一滴和供血者 血清一滴。混匀后 1000rpm 离心 1min，取出观察结果。如两侧均无 凝集现象，可多量输血；如主侧无凝集而次侧有凝集只可考虑少量输 血；如主侧凝集则不能输血。 低离子聚凝胺介质交叉配血试验低离子聚凝胺介质交叉配血试验 实验原理实验原理 红细胞表面带有大量的负电荷， 以避免其产生自发性聚集， 当红细 胞悬浮在电解质时，阳离子会被红细胞的负电荷所吸引，形成 Zeta 电位，Zeta 电位决定红细胞之间的排斥作用。凝聚胺技术首先利用 低离子溶液（LIM，降低介质的离子强度，减少红细胞周围的阳离子 云，以促进红细胞和血清（血浆）中的抗体结合。 其后，加入凝聚 胺溶液，它是一种高价阳离子多聚物、肝素中和剂，溶解后能产生很 多正电荷，可以中和红细胞表面带有的负电荷，使红细胞 Zeta 电位 降低， 缩短红细胞之间的距离， 使红细胞产生非特异性的凝聚。 最后， 加入悬浮液,悬浮液具有中和凝聚胺阳离子的作用，使正常的红细胞 非特异性凝聚散开，试验结果为阴性；但如果红细胞被相应的抗体致 敏，则会被凝聚胺凝结，凝集就不会散开，试验结果为阳性。 实验步骤实验步骤 1 取试管二支，标主次侧，主侧管加病人血清（血浆）2 滴，加供血 者 35红细胞悬液（洗涤或不洗涤均可）1 滴，次侧管反之。 2 各加 LIM0.6ml,混合均匀后，再各加凝聚胺溶液 2 滴，并混合均匀。 3 用离心机 1000 转/min 离心 1min，然后把上清液倒掉，不要沥干， 让管底残留约 0.1ml 液体。 4 轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须要重做。 5 最后加入重新悬浮液 2 滴，轻轻摇动试管混合并同时观察结果。 如 果在 60 秒内凝集散开，代表是由凝聚胺引起的非特异性聚集，配血 结果相合；如凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应， 配血结果不相合。如反应可疑，可进一步倒在玻片上用显微镜观察。 微柱凝胶介质交叉配血试验微柱凝胶介质交叉配血试验 实验原理实验原理 利用抗原抗体特异性反应的作用→通过离心技术→利用凝胶的微孔 过滤作用，将发生凝集反应的 RBC 阻滞于凝胶之内，而未凝集的单 个 RBC 则穿过微孔运动至柱底→从而区分有无凝集。 实验步骤实验步骤 见 PPT 所述。结果判定肉眼直接观察。 （三）实验注意事项实验注意事项 1.器材、试剂、反应温度、离心、标本等注意事项同ABO 血型鉴定。 2.血清优于血浆；不用溶血标本；配血后，标本置冰箱内保存至少 7 天 。 3.RBC 要用生理盐水洗干净。 4.溶血现象，实质是阳性结果，为配血不合。 5.ABO 血型系统同型而不容，应首先排除 ABO 血型鉴定是否有误。 6.盐水介质法仅能检测 IgM 型 RBC 血型抗体，不能检测IgG 型 RBC 抗体。凝聚胺法可以检查出 IgG 型的血型抗体 7.临床输血进行交叉配血试验时，应当首先进行盐水介质法试验， 再进行聚凝胺介质法试验。 8. 聚凝胺介质法试验尽快观察结果＜3min 9.聚凝胺溶液必须保存在深色塑料瓶中。 10. 聚凝胺介质法试验中遇到用含肝素的血标本，要多加聚凝胺。 【思考题】【思考题】 1.在无标准血清情况下已如某人为 A 或 B 型， 能否用其血去检查未知 血型如何作 2.交叉配血时为何主侧不凝集而次侧凝集时，可以少量输血还需注 意些什么 3.红细胞凝固、凝集、聚集三者有何不同