生物化学归纳总结
第二章蛋白质 1.什么是蛋白质的一级结构为什么说蛋白质的一级结构决定其空间结构 蛋白质的一级结构指蛋白质多肽链中氨基酸的排列顺序以及二硫键的位置。 不同的氨基酸排列使得氨基酸R基之间以及多肽链间形成不同的相互作用,这些相互作用使肽链产生一定折叠以及特定的空间结构,所以蛋白质的一级结构决定其空间结构。 2.什么是蛋白质的空间结构蛋白质的空间结构与其生物功能有何关系 蛋白质的空间结构蛋白质的构象,分子中各个原子和基团绕键旋转时可能形成的不同的立体结构。 肽链经α螺旋,β折叠和β转角形成蛋白质二级结构,而在二级结构基础上进一步卷曲折叠又形成蛋白质三级结构,再通过非共价键形成四级结构,这些特定形态即是空间结构。 关系当蛋白质空间结构发生改变或遭到破坏时,它的生物学功能也随之发生改变甚至丧失。 3.测定蛋白质多肽链N端和C端的常用方法有哪些基本原理是什么 测N端2,4二硝基氟苯(DNFB)法;异硫氰酸苯酯PITC法;丹磺酰氯(DNS)法;氨肽酶法。 测C端肼解法;还原法;羧肽酶法。 原理1)多肽或蛋白质的游离末端氨基与DNFB反应,生成DNP-多肽或DNP-蛋白质。DNP-多肽水解,只剩DNP-氨基酸等,乙酸乙酯抽提分析鉴定。 2)多肽或蛋白质的游离末端氨基与PITC作用,生成PTC-多肽或蛋白质。酸性有机溶剂中加热,N-末端的PTC-氨基酸发生环化,生成PTH-氨基酸,乙酸乙酯抽提后,经薄层层析或HPLC等方法鉴定即可。 3原理与DNFB法基本相同,水解后的DNS-氨基酸不需提取,直接用纸电泳或薄层层析等方法分析鉴定。 4)外肽酶逐个切下氨基酸,根据时间测出氨基酸种类和数量,按反应时间和残基释放量作动力学曲线,就可知N-末端残基序列。 1)多肽链过量无水肼C-末端氨基酸氨基酸酰肼 C-末端氨基酸OK 2肽链C-末端氨基酸被硼氢化锂还原成相应的a氨基酸,肽链完全水解后。a-氨基醇用层析法鉴定,确定C-末端氨基酸的种类。 3)外切酶,专一的从肽链C端开始逐个切下游离的氨基酸,根据氨基酸量与反应时间的关系,便可以知道C-末端氨基酸的顺序。 4.蛋白质的α螺旋结构和β折叠结构有何特点 α螺旋 α螺旋是一种重复性结构,每圈螺旋包含36个氨基酸残基,螺距为0.54nm,类似棒状的结构;相邻螺圈之间形成氢键,所有氢键的取向几乎与中心轴平行;天然蛋白质的α螺旋几乎都是右手螺旋。 β折叠 多肽链呈锯齿状折叠,似扇面状;侧链都垂直于折叠平面,并交替分布平面上下两侧,分为平行式与反平行式。 5.什么是蛋白质的变性作用和复性作用蛋白质变性后,其性质会发生哪些改变 变性蛋白质分子因受到某些物理或化学因素的影响,分子内部原有的高度规律性结构发生改变,从而使蛋白质的理化性质和原有的生物学活性都发生改变的现象。 复性当变性因素除去后,在适当条件下变性蛋白质又可以重新恢复其天然构象和生物活性的现象。蛋白质变性后,生物活性丧失,一些侧链基因暴露,一些理化性质改变(溶解度降低,粘度增加,扩散系数降低,旋光和紫外吸收也放生相应变化)生物学性质改变。 6.测定蛋白质含量的方法有哪些简述其原理。 1)凯氏定氮法 蛋白质与硫酸和催化剂一同加热消化,使蛋白质分解,分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离,用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定,根据酸的消耗量乘以换算系数,蛋白质含量。含氮量*6.25蛋白含量 2λ180 3双缩脲 蛋白质含有两个以上的肽键,因此,有双缩脲反应,在碱性溶液中蛋白质与Cu2+形成紫红色络合物,其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比,而与蛋白质的分子量和氨基酸成份无关 4)酸试剂 7.将含有丙氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、精氨酸和组氨酸的溶液点在滤纸中央,在PH6.0的条件下进行电泳,请判断其泳动方向。 PI丙氨酸6.02PH 赖氨酸9.74 PH 天冬氨酸2.97 PH 甘氨酸5,97 PH 精氨酸10.76 PH 组氨酸7.59 PH (几乎)不动丙氨酸、甘氨酸 向正极移动天冬氨酸 向负极移动赖氨酸、精氨酸、组氨酸 8.测得一个蛋白质中Trp残基占总量的0.29,计算该蛋白质的最低相对分子量。 Trp残基相对分子质量204-18186 186/0.2964138 9.测得1mg某蛋白质中含亮氨酸58.1ug和色氨酸36.2ug,计算此蛋白质的最低相对分子质量。 亮氨酸含量色氨酸含量58.1/13136.2/20452 蛋白质相对分子质量131*5*1000/58.111273或204*2*1000/36.211270 蛋白质的最低相对分子质量为11270 10.某四肽与DNFB反应,酸水解后释放出DNP-Ala。用胰蛋白酶水解该四肽,得到两个片段,其中一个用硼氢化锂还原后水解得到氨基乙醇和一种在有浓硫酸条件下能与乙醛酸反应产生紫色产物的氨基酸。根据以上结果写出该四肽可能的氨基酸排列顺序,并说明原因。 H Ala-Arg-Trp-Gly OH H Ala-Lys-Trp-Gly OH 原因酸水解释放DNP-Ala可说明Ala为肽链N端 蛋白酶水解后一段为两个氨基酸,说明Ala后为Arg或Lys 还原法,说明C端为Gly 与乙醛酸反应,说明下一氨基酸为Trp 11.解释下列名词 等电点在氨基酸溶液中存在如下平衡,在一定的pH值溶液中,正离子和负离子数量相等且浓度都很低,而偶极浓度最高,此时电解以偶极离子形式存在,氨基酸不移动。这时溶液的pH值便是该氨基酸的等电点 构型分子中由于各原子或基团间特有的固定的空间排列方式不同而使它呈现出不同的较定的立体结构 构象由于分子中的某个原子基团绕C-C单键自由旋转而形成的不同的暂时性的易变的空间结构形式,不同的构象之间可以相互转变,在各种构象形式中,势能最低、最稳定的构象是优势对象 兼性离子氨基酸等电点(pHpI)时,羧基以-COO-,氨基以-NH3形式存在。这样的氨基酸分子含有一个正电荷和一个负电荷,称为兼性离子 结构域结构域是生物大分子中具有特异结构和独立功能的区域,特别指蛋白质中这样的区域。在球形蛋白中,结构域具有自己特定的四级结构,其功能部依赖于蛋白质分子中的其余部分,但是同一种蛋白质中不同结构域间常可通过不具二级结构的短序列连接起来。蛋白质分子中不同的结构域常由基因的不同外显子所编码 超二级结构超二级结构也称之基元(motif)。是指在球状蛋白质分子的一级结构的基础上,相邻的二级结构单位(α螺旋β