洁净室区表面微生物检测操作规程

标标 准准 操操 作作 规规 程程 （（ STANDARDSTANDARDOPERATINGOPERATINGPROCEDUREPROCEDURE ）） 题题目目洁净室（区）表面微生物检测规程洁净室（区）表面微生物检测规程编编码码SOP-QC-011-00SOP-QC-011-00 文件属性文件属性■新订；■新订； □□ 确认；□确认；□ 修订，第修订，第次，替代次，替代 起起 草草 人人 起草日期起草日期 颁发部门颁发部门品质管理部品质管理部 审审 核核 人人 审核日期审核日期 颁发日期颁发日期2018.07.232018.07.23 批批 准准 人人 批准日期批准日期 生效日期生效日期2018.08.012018.08.01 分发部门分发部门品质管理部品质管理部 1 1 份，检验检测部份，检验检测部 2 2 份，行政人事部份，行政人事部 1 1 份，共印份，共印 4 4 份份 1.目的 规范洁净室（区）表面微生物检测程序，以确切反映生产活动对环境的影响程度。 2.适用范围 适用于洁净室（区）内包括设施、墙面、地面、设备表面和洁净服、操作手套等表面 的微生物监测。 3.责 任 人 QC负责培养基的准备及取样后培养观察记录结果。负责培养皿（液）的中间转运、 记录填写及报告发放。 各车间工序指定人员 负责正常生产时对无菌注射剂车间动态洁净区的表面微生物检 测。 4.正文 4.1测试条件 4.1.1被测洁净室（区）温、湿度、静压差、换气次数和空气的流速必须控制在规定范 围内； 4.1.2测试前，被测试洁净室（区）已经消毒； 4.1.3被测净化空调系统正常运行不少于 30min 后开始测定。 4.2测试人员测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服； 4.3测试前准备 4.3.1定量法培养皿的准备为购买的预灌装表面接触碟平皿，成分为大豆酪蛋白琼脂 营养基（TSA），具有三层包装且经钴 60 辐照的预灌装表面接触碟平皿，可供采样用。 4.3.2定性法培养基的准备 第 1 页 共 8 页 题题目目 洁净室（区）表面微生物洁净室（区）表面微生物 检测规程检测规程 编编码码SOP-QC-011-00SOP-QC-011-00生效日期生效日期2018.08.012018.08.01 4.3.2.1取 250ml 锥形瓶加入 200ml 营养肉汤培养基后，置 121℃湿热灭菌 20min 后备 用； 4.3.2.2取 500ml 锥形瓶加入 400ml 营养肉汤培养基后，置 121℃湿热灭菌 20min 后备 用； 4.3.2.3取 20ml 试管注入 10ml 营养肉汤培养基后加塞，置 121℃湿热灭菌 20min 后备 用。 4.3.3擦拭工具准备 4.3.3.1擦拭用洁净棉签放在烧杯里包裹后，经过 121℃湿热灭菌 20min 后备用。 4.3.3.2生理盐水的准备将配制成的0.9氯化钠溶液分装入 100ml 输液瓶中，每瓶约 30～50ml，加塞轧盖后于 121℃湿热灭菌 20min 后备用。 4.3.3.3过滤用滤器取孔径为 0.45μm，直径 50mm 的滤膜装入滤器中经 121℃湿热灭 菌 20min 后备用。 4.4表面微生物检测点采样位置和点数 4.4.1表面分类 4.4.1.1设施表面产品直接接触的容器的暴露表面、设备的内外表面、墙壁和地面。 4.4.1.2人身表面衣服表面、手套表面。 4.4.2采样位置和采样点数 4.4.2.1设施表面微生物监测的采样布点至少应包含以下部位门把手、地面（人员活 动较多处至少 2 个点） 、墙面（距离地面高度约 1.2～1.5m 处不易被清洁/消毒的部位，至 少 2 个点） 、生产关键性部位（如灌装针头、胶塞桶、输送带）等各 1～2 点。 4.4.2.2人员对 A 级关键区操作人员每班次进行采样监测。参加灌装人员在灌装结束 后均需进行表面采样，每人表面采样位置不得少于5 个。采样点布置在每个手套（5 个手 指） 、胸口、前臂、口罩、前额、膝盖处。每个受训者必须经过 3 次更衣试验确认合格后 才能进入无菌操作区。 4.4.2.3取样应具代表性不宜每次固定在同一点取样，应考虑在取样点附近的不同位 置取样。 对表面和操作人员的监测， 应在关键操作完成后进行。 在正常的生产操作监测外， 可在系统验证、清洁和消毒等操作完成后增加微生物监测。 4.4.3采样量每点采样面积为 25cm2。 4.4.4测试状态及时间 4.4.4.1动态测试； 4.4.4.2生产、检验活动结束，离开洁净区前取样；处理异常情况后（取样后重新更衣 第 2 页 共 8 页 题题目目 洁净室（区）表面微生物洁净室（区）表面微生物 检测规程检测规程 编编码码SOP-QC-011-00SOP-QC-011-00生效日期生效日期2018.08.012018.08.01 或更换手套） ；生产过程中随时监测。 4.5测试操作过程及样品培养要求 4.5.1定量法测试采用接触碟（平板）采样法 4.5.1.1将购买的预灌装表面接触碟平皿，去掉一层外包装消毒，通过传递窗传递至洁 净区内。选择要取样的表面，是培养基的凸面接触取样区域， 用拇指和食指拿稳平板，稳 固的放在已选择取样点上， 稍加用力按压平板底部， 向整个接触表面施加恒定均匀的压力， 使取样点与平板表面接触不少于 10 秒,不得有环形或线性运动。每个采样点取样后，用 75酒精喷洒被采样表面，以除去营养残迹。 4.5.1.2每个采样点取样后，在接触碟平皿盖上写好采样点名称，按顺序叠放好，装进 随包装一起内置的呼吸袋，在呼吸袋外面写好取样日期、温湿度、压差等，倒置于 30～ 35℃培养箱中培养 5 天，取出后点计菌落数并记录。 4.5.2定性法测试 4.5.2.1将已准备好装有营养肉汤培养基的 250ml 锥形瓶，通过传递窗消毒传递至洁净 区内。在 A 级层流保护下，将经灭菌好的西林瓶取3 支、灭菌好的丁基胶塞取 3 只，分别 加入 250ml 锥形瓶内的营养肉汤培养基中。 4.5.2.2将已准备好装有营养肉汤培养基的 500ml 锥形瓶，通过传递窗消毒传递至洁净 区内。在 A 级层流保护下，将经灭菌好的安瓿瓶取 3 支，加入 500ml 锥形瓶内的营养肉汤 培养基中。 4.5.2.3取样后在锥形瓶外壁做好唯一性标记，置于 30～35℃培养箱中直接培养 5 天， 在培养后观察培养基是否混浊。 4.5.2.4棉签擦拭法通常用于对不平整或不规则表面如设备、管道表面进行采样。持 无菌湿棉签以 30角使棉签与所需采样表面接触并转动所持小棒充分擦拭，擦拭面积为 25cm2。如采用计数浓度法则将擦拭后的棉球用剪刀剪入装有生理盐水的输液瓶中，加盖 密封。将装有取样后的棉签生理盐水充分振摇后用薄膜过滤法测定，在 30～35℃恒温培 养箱中培养 5 天，取出后点计菌落数并记录；如采用直接培养法，则将擦拭后的棉签剪入 肉汤培养基试管中，在 30～35℃恒温培养箱中培养 5 天，观察是否混浊。 4.6注意事项 4.6.1在用预灌装表面接触碟平皿（平板）采样时，不要触摸平板侧面； 4.6.2在使用接触平板采样时，